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【求助/交流】将PPIC9K质粒转化到DH5a上怎么总不成功
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shihongling
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[交流]
【求助/交流】将PPIC9K质粒转化到DH5a上怎么总不成功
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我将目的基因与酶切过的PPIC9K在16度连接了20多个小时,之后转化到DH5a中,涂板后12个小时没有长起来,请教各位分析下是什么原因?
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1楼
2010-07-28 08:21:32
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seahow
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专业: 基因表达调控与表观遗传学
涂板大于16小时,你再试试!!
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2楼
2010-07-28 08:31:00
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shihongling
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我同时做了个对照,把空的PPIC9K转到DH5a中不到12个小时就长了好多单菌落了……
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3楼
2010-07-28 09:56:16
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louli
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):给个红包,谢谢回帖交流
确定连上了吗?
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4楼
2010-07-28 10:31:57
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susizheng
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专业: 有机合成
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我觉得是个好现象,至少说明你载体切得干净,没有假阳性,比整板子长满假阳性好多了。换连接酶试试,应该是没连上。
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Thank-you,so-blue.
5楼
2010-07-28 10:35:23
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fungixx
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):给个红包,谢谢回帖交流
酶切回收后的目的片段和质粒做电泳检测了吗,估计是连接之前出的问题
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
6楼
2010-07-28 11:46:18
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skyqiuqiu119
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专业: 生物材料
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):给个红包,谢谢回帖交流
酶切和酶连接完成后,都要电泳检查的,这样才能保证转化之前的正确性。
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哎哟~可爱QQ~不错哦~~
7楼
2010-07-28 16:26:54
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shihongling
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谢谢大家啦!
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8楼
2010-07-29 20:52:05
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7楼
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Originally posted by
skyqiuqiu119
at 2010-07-28 16:26:54
酶切和酶连接完成后,都要电泳检查的,这样才能保证转化之前的正确性。
连接完之后怎么电泳检查?拷贝数不够的啊?可以的吗?
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随波逐流的人注定没有完整的人生
9楼
2013-12-28 16:27:15
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