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qingsong35

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教pPIC9K问题 已有3人参与

请教一下各位前辈，质粒pPIC9K上的HIS和Knanmycin如何表达，好像在载体上没有看到它们的启动子序列啊？！载体pPICZA上的Zeocin有Ptef1和Pem7启动子，能够启动Zeocin在酵母和大肠中的表达，那么pPIC9K上的HIS和Knanmycin是怎么表达的呢？谢谢
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1楼 2010-06-07 19:08:36
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):谢谢交流！:tiger06: 2010-06-07 22:01:46
kan基因与表达盒之间是遗传连锁关系，所以应该与目的基因共用pAOX1。
His4我觉得有两种情况，一种情况是双交换时，整个表达元件整合进基因组替换了AOX1，此时His4与Kan一样，与目的基因共用pAOX1;另一种情况是单交换，在His4处用Sal I 线性化，整合位点在基因组His4基因处，这样原本his-表型变为His+，这时His4的表达用的是基因组上自身His4 promoter。
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Thank-you，so-blue.
2楼2010-06-07 20:33:01
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qingsong35

铜虫 (小有名气)
感谢susizheng的指导
应该不是用AOX启动子吧，HIS4前面有AOX的终止子的。
3' AOX1 transcription termination (TT):bases 1253-1586
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3楼2010-06-08 13:43:33
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风荻

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是3‘AOX启动子做启动，3’TT做终止
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4楼2010-06-08 14:51:34
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风荻

金虫 (小有名气)
你可以看看9K的图谱，按上面说的，两个就可以同时表达了
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5楼2010-06-08 14:53:00
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qingsong35

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 风荻 at 2010-06-08 14:51:34:
是3‘AOX启动子做启动，3’TT做终止

谢谢指导
说明书上说
3´ AOX1： Sequences from the AOX1 gene that are further 3´ to the TT sequences(~650 bp)，Targets plasmid integration at the AOX1 gene

3‘AOX这段序列不是在与酵母基因组整合的使用起作用的吗？


[ Last edited by qingsong35 on 2010-6-8 at 17:19 ]
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6楼2010-06-08 16:58:59
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风荻

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酵母基因组上有AOX基因，他帮忙整合，不影响他对后面的两个基因的启动的
整合上去后，它应该还是完整的，具有启动功能
比如3’AOX分两部分: 1-2，基因组上整合时也分开成两部分：2-1，
这样它整合上去后就是1（基因组）-----2（9k）1----2（基因组）
这样3’AOX他是能保证完整功能启动后面了
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7楼2010-06-09 11:11:28
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