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qingsong35

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教pPIC9K问题 已有3人参与

请教一下各位前辈,质粒pPIC9K上的HIS和Knanmycin如何表达,好像在载体上没有看到它们的启动子序列啊?!载体pPICZA上的Zeocin有Ptef1和Pem7启动子,能够启动Zeocin在酵母和大肠中的表达,那么pPIC9K上的HIS和Knanmycin是怎么表达的呢?谢谢
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风荻

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
酵母基因组上有AOX基因,他帮忙整合,不影响他对后面的两个基因的启动的
整合上去后,它应该还是完整的,具有启动功能
比如3’AOX分两部分: 1-2,基因组上整合时也分开成两部分:2-1,
这样它整合上去后就是1(基因组)-----2(9k)1----2(基因组)
这样3’AOX他是能保证完整功能启动后面了
7楼2010-06-09 11:11:28
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+3):谢谢交流!:tiger06: 2010-06-07 22:01:46
kan基因与表达盒之间是遗传连锁关系,所以应该与目的基因共用pAOX1。
His4我觉得有两种情况,一种情况是双交换时,整个表达元件整合进基因组替换了AOX1,此时His4与Kan一样,与目的基因共用pAOX1;另一种情况是单交换,在His4处用Sal I 线性化,整合位点在基因组His4基因处,这样原本his-表型变为His+,这时His4的表达用的是基因组上自身His4 promoter。
Thank-you,so-blue.
2楼2010-06-07 20:33:01
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qingsong35

铜虫 (小有名气)

感谢susizheng的指导
应该不是用AOX启动子吧,HIS4前面有AOX的终止子的。
3' AOX1 transcription termination (TT):bases 1253-1586
3楼2010-06-08 13:43:33
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风荻

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是3‘AOX启动子做启动,3’TT做终止
4楼2010-06-08 14:51:34
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