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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】将PPIC9K质粒转化到ＤＨ５ａ上怎么总不成功
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shihongling

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】将PPIC9K质粒转化到ＤＨ５ａ上怎么总不成功 已有7人参与

我将目的基因与酶切过的ＰＰＩＣ９Ｋ在１６度连接了２０多个小时，之后转化到ＤＨ５ａ中，涂板后１２个小时没有长起来，请教各位分析下是什么原因？
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1楼 2010-07-28 08:21:32
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seahow

木虫 (著名写手)
涂板大于16小时，你再试试！！
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2楼2010-07-28 08:31:00
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shihongling

金虫 (小有名气)
我同时做了个对照，把空的ＰＰＩＣ９Ｋ转到ＤＨ５ａ中不到１２个小时就长了好多单菌落了……
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3楼2010-07-28 09:56:16
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louli

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
确定连上了吗？
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4楼2010-07-28 10:31:57
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我觉得是个好现象，至少说明你载体切得干净，没有假阳性，比整板子长满假阳性好多了。换连接酶试试，应该是没连上。
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Thank-you，so-blue.
5楼2010-07-28 10:35:23
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶切回收后的目的片段和质粒做电泳检测了吗，估计是连接之前出的问题
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
6楼2010-07-28 11:46:18
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skyqiuqiu119

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶切和酶连接完成后，都要电泳检查的，这样才能保证转化之前的正确性。
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哎哟~可爱QQ~不错哦~~
7楼2010-07-28 16:26:54
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shihongling

金虫 (小有名气)
谢谢大家啦！
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8楼2010-07-29 20:52:05
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趁风依旧

金虫 (小有名气)

初入文坛
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by skyqiuqiu119 at 2010-07-28 16:26:54
酶切和酶连接完成后，都要电泳检查的，这样才能保证转化之前的正确性。

连接完之后怎么电泳检查？拷贝数不够的啊？可以的吗？
赞一下 回复此楼
随波逐流的人注定没有完整的人生
9楼2013-12-28 16:27:15
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