24小时热门版块排行榜    

查看: 2073  |  回复: 11

小米一粒m

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】大片段连接转化成功与否问题 已有6人参与

我的载体是pWL89a,电泳带大小5000bp多,单酶切切开后电泳带将近8000bp,目的片段4000bp左右,连接转化后有单菌落长出,挑菌培养后提质粒,质粒电泳后大小却略在4000bp左右,有可能插入后片段跑电泳的大小比原载体小吗?对引物进行特异性扩增扩出的目的条带大小正确,有可能是目的片段自连吗?请高手支招,谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小米一粒m

新虫 (初入文坛)

scelab:交流贴请勿纯表!自己的也不行 2010-07-27 23:44:24
2楼2010-07-27 19:32:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rosalie161

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
把质粒单酶切开,看能扩出你的目的条带不。
Rosalei.....
3楼2010-07-27 21:08:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
以前我也遇到类似的情况,PCR扩出来了,但是就是大小感觉不对。吓得我也没敢用。只好多挑了几个克隆,当时挑了十个,只有一个对的。
4楼2010-07-27 23:18:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小米一粒m

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by sunyongle1 at 2010-07-27 23:18:50:
以前我也遇到类似的情况,PCR扩出来了,但是就是大小感觉不对。吓得我也没敢用。只好多挑了几个克隆,当时挑了十个,只有一个对的。

你说最后挑出一个对的,那个成功的电泳大小是不是比环状载体大呢?其余九个是比环状载体小吗?PCR都能扩出目的条带是吧?
5楼2010-07-28 10:28:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小米一粒m

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by rosalie161 at 2010-07-27 21:08:06:
把质粒单酶切开,看能扩出你的目的条带不。

嗯,是个好办法,不确定的话就要这样检验了
6楼2010-07-28 10:30:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 小米一粒m at 2010-07-28 10:28:57:
你说最后挑出一个对的,那个成功的电泳大小是不是比环状载体大呢?其余九个是比环状载体小吗?PCR都能扩出目的条带是吧?

至于是不是比环状载体大,我忘了。但是大小肯定是不对的。不过PCR都扩出来了。
7楼2010-07-28 12:29:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小米一粒m

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by sunyongle1 at 2010-07-28 12:29:07:

至于是不是比环状载体大,我忘了。但是大小肯定是不对的。不过PCR都扩出来了。

那你说的有一个对的,你是怎么判断是对的呢?测序吗?
8楼2010-07-28 13:24:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
直接酶切鉴定,看到酶切后有我的载体,和目的片段。而且大小都对。要是不切的话,大小等于载体和片段的和
9楼2010-07-28 13:34:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by rosalie161 at 2010-07-27 21:08:06:
把质粒单酶切开,看能扩出你的目的条带不。

什么意思啊?我不太懂这样做有什么好处呢?
10楼2010-07-28 14:39:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小米一粒m 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 281求调剂(0805) +3 烟汐忆海 2026-03-16 8/400 2026-03-18 00:47 by 烟汐忆海
[考研] 0703化学调剂 ,六级已过,有科研经历 +8 曦熙兮 2026-03-15 8/400 2026-03-17 20:31 by xilongliang
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-16 8/400 2026-03-17 19:03 by Wangjingyue
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 302求调剂 +9 负心者当诛 2026-03-11 9/450 2026-03-17 17:13 by ruiyingmiao
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-15 6/300 2026-03-17 11:05 by 学员h26Tkc
[考研] 一志愿南京大学,080500材料科学与工程,调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 一志愿,福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +5 d如愿上岸 2026-03-12 8/400 2026-03-16 15:19 by peike
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历,论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 331求调剂(0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 招收0805(材料)调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123! 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂! +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
信息提示
请填处理意见