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yesucao木虫 (正式写手)
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载体连接
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我的实验情况如下： 1、目的基因片段和表达载体同时进行双酶切，割胶回收，跑胶验证，晚上进行连接；（回收的大小没有问题） 2、转化大肠杆菌DH5a； 3、转化子PCR验证目的片段的大小；（条带大小正确） 4、挑取转化子摇菌、提质粒并进行双酶切验证，（这个时候出现问题了） 问题如下： 1、重组质粒双酶切显示：目的基因的片段大小正确 720bp，但是载体大片段的大小只有3500bp，按理说的话载体的大片段有5500bp左右的； 2、重组质粒单酶切显示：条带大小显示在3500-5500之间；（似乎和双酶切两条片段的大小之和一致） 按照重组质粒的单、双酶切实验验证，在提质粒、酶切上实验没有问题，转化实验本身也没有问题，难道是我连接有问题？？？ 我的连接体系： 目的片段 12微升 载体 4微升 T4 2微升 Buffer 2微升 |
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