| 查看: 1695 | 回复: 7 | |||
yesucao木虫 (正式写手)
|
[求助]
载体连接
|
|
我的实验情况如下： 1、目的基因片段和表达载体同时进行双酶切，割胶回收，跑胶验证，晚上进行连接；（回收的大小没有问题） 2、转化大肠杆菌DH5a； 3、转化子PCR验证目的片段的大小；（条带大小正确） 4、挑取转化子摇菌、提质粒并进行双酶切验证，（这个时候出现问题了） 问题如下： 1、重组质粒双酶切显示：目的基因的片段大小正确 720bp，但是载体大片段的大小只有3500bp，按理说的话载体的大片段有5500bp左右的； 2、重组质粒单酶切显示：条带大小显示在3500-5500之间；（似乎和双酶切两条片段的大小之和一致） 按照重组质粒的单、双酶切实验验证，在提质粒、酶切上实验没有问题，转化实验本身也没有问题，难道是我连接有问题？？？ 我的连接体系： 目的片段 12微升 载体 4微升 T4 2微升 Buffer 2微升 |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有288人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
2楼2011-07-01 17:24:19
yuxia82012
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 4980
- 散金: 2225
- 红花: 2
- 帖子: 1340
- 在线: 426.5小时
- 虫号: 781881
- 注册: 2009-05-29
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
3楼2011-07-01 17:49:31
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16334.8
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3653
- 在线: 289小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
4楼2011-07-01 17:54:22
5楼2011-07-03 10:24:11
足下客
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 10
- 应助: 39 (小学生)
- 金币: 1858.8
- 散金: 211
- 红花: 12
- 帖子: 888
- 在线: 110.4小时
- 虫号: 426612
- 注册: 2007-07-28
- 性别: MM
- 专业: 临床分子生物学检验
6楼2011-07-03 11:03:31
7楼2011-07-24 22:49:01
yesucao
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 51 (初中生)
- 金币: 3877.1
- 散金: 45
- 红花: 6
- 帖子: 374
- 在线: 203.4小时
- 虫号: 810829
- 注册: 2009-07-17
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
8楼2011-07-25 19:28:56
