24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 2178  |  回复: 21

tuodecai

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+2):辛苦~~~ 2010-04-26 17:13
我都快扩了一年的10KB的全长,用的是宝生物LA Taq,酶都用N支,有时候能扩出来,有时候又扩不出来,以前都是用cDNA扩的,不过非特异带很多,目的带的量也很少。最近试了两次用回收的产物再次P,好像有扩出来,不过非特异带照样有,而且量更少了,以前我是从未P出来过。搞了这么久,也没总结出现什么经验,有一点是肯定的:长片段的确难扩!最近我在全长两端加上几百bp的片段,又搞了快一个月了,基本上每天P一次,我都要快崩溃了。老板还老说老子不努力,想到要毕业,我就想骂人。兄弟,没事儿的5K的肯定没问题的,努把力。望早日成功!
11楼2010-04-25 15:43:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxyjenny6

新虫 (小有名气)

呵呵,看来你比我更头疼啊。我这才刚开始做呢,这个P不出来后面的没法做啊,而且P一次时间又很长,每次都是等了半天出不了结果,郁闷的积极性都没了。对了,你的条件是怎样的啊?我看到貌似有的人说长片段PCR要用两步法,可是我的退火温度为55℃时就只有引物二聚体了,其他啥都没……
12楼2010-04-26 13:44:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-26 17:13
我用  takara 的 ex  。。最多扩过6k的片段。。 延伸温度一定要长。  这个酶是可以做到这么长的的
13楼2010-04-26 14:19:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxyjenny6

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yixuanwin at 2010-04-26 14:19:51:
我用  takara 的 ex  。。最多扩过6k的片段。。 延伸温度一定要长。  这个酶是可以做到这么长的的

呵呵,延伸温度要高还是延伸时间要长?方便透露一下条件吗?
                                 非常感谢
14楼2010-04-26 16:16:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaorr

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
加油,呵呵
愿你生命中的每一天都快乐
15楼2010-04-26 18:57:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用重叠PCR好了,中间设计一个引物~分开P
16楼2010-04-27 15:46:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

375050424

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用Takara的LA taq酶和buffer应该没问题,72度延伸6min左右
17楼2010-04-27 16:26:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用 LA的酶 最多可以扩 8k的片段。很稳
18楼2010-05-05 20:40:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cnb1987

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
291688楼: Originally posted by 墨香若水 at 2010-04-24 16:52:38
设计的引物稍长点 循环次数减短

引物稍长些?30bp怎么样?
19楼2012-10-29 14:20:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biopanda

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
1274641楼: Originally posted by cnb1987 at 2012-10-29 14:20:19
引物稍长些?30bp怎么样?...

30bp不短
仕不可不弘毅,任重而道远。
20楼2012-10-30 13:01:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zxyjenny6 的主题更新
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见