24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 2216  |  回复: 21
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zxyjenny6

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】5500bp的片段PCR问题已有18人参与

各位大侠:本人最近在做一段5500bp的目的基因的PCR,采用的是takara的EX TAQ酶,选择的引物应该没有问题,按照相关原则设定了反应条件,并且在此基础上稍作改变尝试了几次,但都没有P出来。想请问各位,有没有什么好的建议或者应该怎样改进反应条件,能把我要的目的基因P出来。O(∩_∩)O谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxyjenny6

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yixuanwin at 2010-04-26 14:19:51:
我用  takara 的 ex  。。最多扩过6k的片段。。 延伸温度一定要长。  这个酶是可以做到这么长的的

呵呵,延伸温度要高还是延伸时间要长?方便透露一下条件吗?
                                 非常感谢
14楼2010-04-26 16:16:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

shengwufenzi

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 2010-04-25 13:11
你做的片段有些大,肯定不好做的。再有一方法是先扩增此基因的一部分片段,再酶切后做反向PCR,不过难度也是挺大的,实在不行,你可以试试
2楼2010-04-24 16:22:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-25 13:11
扩增长片段的时候,你的模板一定要纯,
3楼2010-04-24 16:52:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-25 13:11
设计的引物稍长点 循环次数减短
仕不可不弘毅,任重而道远
4楼2010-04-24 16:52:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见