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zxyjenny6

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】5500bp的片段PCR问题已有18人参与

各位大侠:本人最近在做一段5500bp的目的基因的PCR,采用的是takara的EX TAQ酶,选择的引物应该没有问题,按照相关原则设定了反应条件,并且在此基础上稍作改变尝试了几次,但都没有P出来。想请问各位,有没有什么好的建议或者应该怎样改进反应条件,能把我要的目的基因P出来。O(∩_∩)O谢谢!
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上

★ ★ ★ ★
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1949stone(金币+3): 2010-04-25 13:12
以前扩6K的片段用的是一种高延展的酶,哪家公司的我给忘了。
保真性如何不清楚,没测过序,因为只是做检测
一开始没扩出来,后来发现是提取的细菌总DNA不够好,可能是有机试剂没去干净
最后往体系里加了点DMSO就出来了
终于熬成木虫了……
9楼2010-04-25 07:35:37
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shengwufenzi

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
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1949stone(金币+2): 2010-04-25 13:11
你做的片段有些大,肯定不好做的。再有一方法是先扩增此基因的一部分片段,再酶切后做反向PCR,不过难度也是挺大的,实在不行,你可以试试
2楼2010-04-24 16:22:48
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gastrodia

金虫 (正式写手)

★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-04-25 13:11
扩增长片段的时候,你的模板一定要纯,
3楼2010-04-24 16:52:30
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-04-25 13:11
设计的引物稍长点 循环次数减短
仕不可不弘毅,任重而道远
4楼2010-04-24 16:52:38
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