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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR扩增核心片段，再也扩不出来了，怎么办
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】PCR扩增核心片段，再也扩不出来了，怎么办 已有11人参与

自己设计引物做PCR扩增一核心片段，以前扩出来过，并且很特异，带很亮，回收了，转化没成功，重新扩，再也扩不出来了，怎么办？现在所有的试剂、反应条件都跟以前一摸一样，PCR后跑电泳却只有很长的拖带，请问是怎么回事？如何才能重新把那条带扩出来？
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
1楼 2010-06-12 16:02:37
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
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估计是模板降解了，重新制备下模板试试。另外，PCR的时候作平行的两管。
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3楼2010-06-13 08:21:08
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xpb2005

银虫 (小有名气)
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模板是以前的还是重提的？
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2楼2010-06-12 20:39:59
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by xpb2005 at 2010-06-12 20:39:59:
模板是以前的还是重提的？

模板没问题，扩b-actin扩的很好
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
4楼2010-06-13 11:26:48
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by lixg at 2010-06-13 08:21:08:
估计是模板降解了，重新制备下模板试试。另外，PCR的时候作平行的两管。

模板没问题，新提的RNA做的反转录，b-actin扩的很好啊，就是我要的那条带扩不出来，做了很多次了，也做了很多平行了
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
5楼2010-06-13 11:49:58
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xpb2005

银虫 (小有名气)
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Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2010-06-13 11:26:48:

模板没问题，扩b-actin扩的很好

那我觉得只能是再重复了，坚持再坚持，我也遇到和你一样的问题，师姐去年做出来了，今年来了再做就做不出来了，跑胶泳道全白。能传一张你的图片吗/
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6楼2010-06-13 21:08:02
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dhd997

荣誉版主 (文坛精英)

自由人，我型我秀！

优秀版主
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好好想想哪里出问题了吧？
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人生不过几十年，成败荣辱都在天，是非恩怨莫在意，健康快乐最值钱，自古人间苦无边，看得高远境如仙，愿你不为凡事恼，轻松快乐每一天。
7楼2010-06-13 21:12:22
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
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lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-06-14 21:54:55
actin无内含子，如果模板有基因组污染的话，actin引物扩的是以actin的 DNA为模板p的产物，因此即使actin能扩出来，也不能说明你的mRNA没问题。
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8楼2010-06-14 10:38:01
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by xpb2005 at 2010-06-13 21:08:02:

那我觉得只能是再重复了，坚持再坚持，我也遇到和你一样的问题，师姐去年做出来了，今年来了再做就做不出来了，跑胶泳道全白。能传一张你的图片吗/

图片没存下来，看着没有就没存，就是很长的白色拖带
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
9楼2010-06-15 12:18:34
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microsome

银虫 (小有名气)
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还是上次合成的引物吗   如果是   夏季的温度变化有影响  选个凉快的天气试试
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10楼2010-06-15 21:14:46
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