应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教两条片段通过PCR桥接扩增的方法
111/2返回列表12下一页
查看: 3206  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

noheartman

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教两条片段通过PCR桥接扩增的方法 已有9人参与

我有两段DNA，其中一段1.5Kb,另外一段只有60bp,想通过PCR桥接的方法把它们连接起来再进行扩增，想得到1500+60的片段，请教大虾，该怎么做才好。本来计划通过单独的PCR加酶切位点扩增后，胶回收连接起来，但60bp的DNA回收起来有困难，要不有好的回收方法也可以，请赐教。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-27 21:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyw1989960

木虫 (正式写手)

快乐家族二十八
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-07-27 23:43:27
第二个片段也太小了，做融合PCR也不好做，1500与1500+60估计电泳也看不出区别
赞一下(1人) 回复此楼
快乐家族
2楼2010-07-27 21:59:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)
★
noheartman(金币+1): 2010-07-28 15:25:09
lstt09nk(金币+1):正解~~ 2010-07-29 09:34:37
确实不太好办，你干脆直接把60bp合成引物算了。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-07-27 23:14:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junior850621

铁杆木虫 (著名写手)
noheartman(金币+1): 2010-07-28 15:25:02
同意二楼
回复此楼
4楼2010-07-28 00:16:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
noheartman(金币+1): 2010-07-28 15:24:59
引用回帖:
Originally posted by sunyongle1 at 2010-07-27 23:14:27:
确实不太好办，你干脆直接把60bp合成引物算了。

这个才是正解！
回复此楼
5楼2010-07-28 11:31:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
noheartman(金币+1): 2010-07-28 15:24:48
同意直接合成一条八十几个碱基的长引物（与长序列有20多个bp的重叠区），然后跟长序列上的引物PCR就可以。。。
    短片段回收 直接乙醇沉淀就行。。。
赞一下 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
6楼2010-07-28 11:36:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

steamsn

金虫 (小有名气)
noheartman(金币+1): 2010-07-28 15:24:54
同意楼上的意见，直接将其作为引物的来进行PCR
赞一下 回复此楼
我命由我不由天
7楼2010-07-28 11:38:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

noheartman

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-07-28 11:31:03:


这个才是正解！

80多个碱基的引物，我以前没有做过，那Tm值会超高，那是不是只要两步法呢，退火和延伸合并成一步呢？
赞一下 回复此楼
8楼2010-07-28 15:32:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxping11230

铁虫 (小有名气)
如果模板是质粒的话，80多个碱基的引物可以与30多的常规引物搭配的，我经常这样做 没问题。而且简单，只是扩增时最好用高保真酶！
赞一下 回复此楼
快乐的科研
9楼2010-07-28 17:24:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxping11230

铁虫 (小有名气)
没必要两步法，就常规PCR
赞一下 回复此楼
快乐的科研
10楼2010-07-28 17:25:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 noheartman 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工 +6 安全上岸！ 2026-03-16 6/300 2026-03-20 15:07 by lbsjt
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 一志愿南昌大学，327分，材料与化工085600 +5 Ncdx123456 2026-03-19 5/250 2026-03-20 11:15 by wangy0907
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考！ +3 lemonzzn 2026-03-17 4/200 2026-03-20 11:04 by lemonzzn
[考研] 271材料工程求调剂 +7 .6lL 2026-03-18 7/350 2026-03-20 09:10 by xingguangj
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +3 葵梓卫队 2026-03-18 5/250 2026-03-19 19:35 by 给你你注意休息
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 6/300 2026-03-19 17:18 by fei626-918
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-19 14:07 by peike
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 3/150 2026-03-19 13:36 by houyaoxu
[考研] 332求调剂 +3 ydfyh 2026-03-17 3/150 2026-03-19 10:14 by 功夫疯狂
[教师之家] 焦虑 +9 水冰月月野兔 2026-03-13 13/650 2026-03-19 09:50 by otani
[考研] 295求调剂 +3 一志愿京区211 2026-03-18 5/250 2026-03-18 17:03 by zhaoqian0518
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 一志愿，福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 321求调剂 +5 大米饭！ 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭