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cpumxl

金虫 (小有名气)

[求助] 空白也PCR出的两条带

你好,麻烦帮我分析下,为啥我的空白(以水做模板)PCR也p出了条带,可能是哪儿出来问题啊?图中从右到左以此为:含目的基因的质粒(公司全合成的基因)、pET28、水为模板的PCR产物、含目的基因的质粒为模板的PCR产物、pET28为模板的PCR产物、marker(从下往上100、200、300、400bp)、水为模板的PCR产物、含目的基因的质粒为模板的PCR产物、pET28为模板的PCR产物。P出来的条带为四百多bp,跟我的目的基因是吻合的,可是不知道为啥以水和pET28为模板也会p出条带,而且有两条。谢谢!
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healerly

禁虫 (小有名气)


wanhscn(金币+1): 鼓励应助! 2011-10-22 15:23:46
cpumxl(金币+1): 应该是操作问题,我没有无菌操作,可是我又P了一次!pET还是p除了两条带,可能是为什么啊?谢谢! 2011-10-22 23:43:34
本帖内容被屏蔽

2楼2011-10-22 12:33:02
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三目

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-10-22 15:23:54
cpumxl(金币+1): 应该是操作问题,我没有无菌操作,可是我又P了一次!pET还是p除了两条带,可能是为什么啊?谢谢! 2011-10-22 23:43:43
肯定是操作不规范,ddH2O或者是枪头,EP管什么的受到了污染了
3楼2011-10-22 12:35:06
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

cpumxl(金币+1): 应该是操作问题,我没有无菌操作,可是我又P了一次!pET还是p除了两条带,可能是为什么啊?谢谢! 2011-10-22 23:43:49
操作不规范,受到了污染
4楼2011-10-22 21:01:20
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931624555

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一方面是原材料问题,另一方面是人为的操作问题
5楼2011-10-22 21:44:18
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dengqitao

捐助贵宾 (正式写手)


【答案】应助回帖

★ ★ ★
cpumxl(金币+2): 应该是操作问题,我没有无菌操作,可是我又P了一次!pET还是p除了两条带,可能是为什么啊?谢谢! 2011-10-22 23:43:56
西瓜(金币+3): Good 2011-10-26 22:24:03
如果水为模板也扩增出条带,必是体系有污染,四百多bp位小片段,更容易出现污染问题。可设计对照试验排除是引物、酶或是buffer被污染,在这之前当然是先得实验室、台面消毒(照紫外,通风等),水、tip头等灭菌消毒,操作时带手套与口罩等。
6楼2011-10-22 22:33:57
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三目

木虫 (小有名气)

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助! 2011-10-23 10:54:00
引用回帖:
3楼: Originally posted by 三目 at 2011-10-22 12:35:06:
肯定是操作不规范,ddH2O或者是枪头,EP管什么的受到了污染了

PCR操作的话,一般就在实验台上操作,也不会特意去超净工作台操作,所以细菌污染也不可能的;可能的就是你用的材料被污染了(就是大家都用,混入了其他的DNA之类的),不过我看你的那两个质粒都有前拖尾现象,这也应该是个原因吧,提得质量不太好啊
7楼2011-10-22 23:53:55
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780871756

新虫 (初入文坛)

是引物二聚体吧
aa
8楼2011-10-23 21:58:37
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wxq999

新虫 (小有名气)

西瓜:编辑内容 2011-10-24 17:51
-------------广告内容-----------------
该虫多次发布广告,为了避免版主刷管理记录的嫌疑,不再每个帖子单独扣分,而是分几次重罚。请自重,勿扰乱论坛的正常交流!

[ Last edited by 西瓜 on 2011-10-24 at 17:51 ]
9楼2011-10-24 17:03:51
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cpumxl

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 780871756 at 2011-10-23 21:58:37:
是引物二聚体吧

要是引物二聚体不会有400bp这么大啊?
10楼2011-10-24 23:05:34
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