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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 空白也PCR出的两条带
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cpumxl

金虫 (小有名气)

[求助] 空白也PCR出的两条带

你好，麻烦帮我分析下，为啥我的空白（以水做模板）PCR也p出了条带，可能是哪儿出来问题啊？图中从右到左以此为：含目的基因的质粒（公司全合成的基因）、pET28、水为模板的PCR产物、含目的基因的质粒为模板的PCR产物、pET28为模板的PCR产物、marker（从下往上100、200、300、400bp）、水为模板的PCR产物、含目的基因的质粒为模板的PCR产物、pET28为模板的PCR产物。P出来的条带为四百多bp，跟我的目的基因是吻合的，可是不知道为啥以水和pET28为模板也会p出条带，而且有两条。谢谢！
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1楼 2011-10-22 11:04:50
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healerly

禁虫 (小有名气)
★
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-10-22 15:23:46
cpumxl(金币+1): 应该是操作问题，我没有无菌操作，可是我又P了一次！pET还是p除了两条带，可能是为什么啊？谢谢！ 2011-10-22 23:43:34
本帖内容被屏蔽
2楼2011-10-22 12:33:02
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三目

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-10-22 15:23:54
cpumxl(金币+1): 应该是操作问题，我没有无菌操作，可是我又P了一次！pET还是p除了两条带，可能是为什么啊？谢谢！ 2011-10-22 23:43:43
肯定是操作不规范，ddH2O或者是枪头，EP管什么的受到了污染了
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3楼2011-10-22 12:35:06
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

cpumxl(金币+1): 应该是操作问题，我没有无菌操作，可是我又P了一次！pET还是p除了两条带，可能是为什么啊？谢谢！ 2011-10-22 23:43:49
操作不规范，受到了污染
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4楼2011-10-22 21:01:20
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931624555

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一方面是原材料问题，另一方面是人为的操作问题
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5楼2011-10-22 21:44:18
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dengqitao

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
cpumxl(金币+2): 应该是操作问题，我没有无菌操作，可是我又P了一次！pET还是p除了两条带，可能是为什么啊？谢谢！ 2011-10-22 23:43:56
西瓜(金币+3): Good 2011-10-26 22:24:03
如果水为模板也扩增出条带，必是体系有污染，四百多bp位小片段，更容易出现污染问题。可设计对照试验排除是引物、酶或是buffer被污染，在这之前当然是先得实验室、台面消毒（照紫外，通风等），水、tip头等灭菌消毒，操作时带手套与口罩等。
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6楼2011-10-22 22:33:57
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三目

木虫 (小有名气)
★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-10-23 10:54:00
引用回帖:
3楼: Originally posted by 三目 at 2011-10-22 12:35:06:
肯定是操作不规范，ddH2O或者是枪头，EP管什么的受到了污染了

PCR操作的话，一般就在实验台上操作，也不会特意去超净工作台操作，所以细菌污染也不可能的；可能的就是你用的材料被污染了（就是大家都用，混入了其他的DNA之类的），不过我看你的那两个质粒都有前拖尾现象，这也应该是个原因吧，提得质量不太好啊
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7楼2011-10-22 23:53:55
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780871756

新虫 (初入文坛)
是引物二聚体吧
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aa
8楼2011-10-23 21:58:37
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wxq999

新虫 (小有名气)
西瓜:编辑内容 2011-10-24 17:51
-------------广告内容-----------------
该虫多次发布广告，为了避免版主刷管理记录的嫌疑，不再每个帖子单独扣分，而是分几次重罚。请自重，勿扰乱论坛的正常交流！

[ Last edited by 西瓜 on 2011-10-24 at 17:51 ]
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9楼2011-10-24 17:03:51
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cpumxl

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 780871756 at 2011-10-23 21:58:37:
是引物二聚体吧

要是引物二聚体不会有400bp这么大啊？
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10楼2011-10-24 23:05:34
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