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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 空白也PCR出的两条带
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李天森

铁虫 (初入文坛)
★
西瓜(金币+1): 鼓励分享经验 2011-10-26 22:24:36
换水 换个地方做实验 最好换一间实验室试一试，我们实验室有好多跟你类似的事情，只加入水 就有条带。换个地方
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11楼2011-10-24 23:28:51
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清风寨

银虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-10-26 22:24:47
原因可能是污染  有可能是你的反应体系被你的模板污染了   还有可能是跑胶上样时 样品飘过去的   建议换换水先做一下 不行再更换反应体系中的全部试剂
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冷风过心变热
12楼2011-10-25 08:29:52
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780871756

新虫 (初入文坛)
也有可能是非特异性扩增，，，也就是不是你想要的条带。。
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aa
13楼2011-10-26 22:00:34
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cloverplm

金虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-10-26 22:24:59
引用回帖:
1楼: Originally posted by cpumxl at 2011-10-22 11:04:50:
你好，麻烦帮我分析下，为啥我的空白（以水做模板）PCR也p出了条带，可能是哪儿出来问题啊？图中从右到左以此为：含目的基因的质粒（公司全合成的基因）、pET28、水为模板的PCR产物、含目的基因的质粒为模板的PCR ...

我怎么看也感觉你这个Marker 下面有很多条带啊，不像你说的10，200，300，400bp，条带也不够清晰。
另外，从对照看,必定有污染。试剂，水，操作或者实验环境有污染都有可能，重新做吧，一个个排除。
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净——静——竞——进
14楼2011-10-26 22:17:15
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cpumxl

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by cloverplm at 2011-10-26 22:17:15:
我怎么看也感觉你这个Marker 下面有很多条带啊，不像你说的10，200，300，400bp，条带也不够清晰。
另外，从对照看,必定有污染。试剂，水，操作或者实验环境有污染都有可能，重新做吧，一个个排除。

是的，这次买的marker很不给力！我重做了一遍，水没有p出东西来，可是pET
为模板的还是有两条带，很是不解啊！师姐说有些东西就是解释不清，呵呵...
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15楼2011-10-27 13:49:47
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cloverplm

金虫 (小有名气)

所有东西全部换新的做，枪最好也要清理下，实验环境也可以用核酸消除剂处理，最重要的是操作一定要注意，动作幅度不要太大。
祝你好运！
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净——静——竞——进
16楼2011-10-27 20:51:38
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yunzhifei

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
西瓜(金币+2): good 2011-10-28 15:32:26
仔细看了一下你的图片，H2O的条带虽暗了一点，但形状和你的“含目的基因的质粒为模板的PCR产物”的条带一样，所以我认为你是不是电泳加样是没换枪头，或者就是加样孔中样液溢出了，再者就是污染，水污染、没污染、Buffer污染
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17楼2011-10-27 23:15:42
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陈青chenqing

铜虫 (初入文坛)
只要是PCR的产物都有那两条带  所以至少有一条带是引物二聚体  而且你这点用跑的水平实在不敢恭维
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自己的未来自己创造！
18楼2011-10-28 00:12:39
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sl35537417

木虫 (正式写手)
引用回帖:
1楼: Originally posted by cpumxl at 2011-10-22 11:04:50:
你好，麻烦帮我分析下，为啥我的空白（以水做模板）PCR也p出了条带，可能是哪儿出来问题啊？图中从右到左以此为：含目的基因的质粒（公司全合成的基因）、pET28、水为模板的PCR产物、含目的基因的质粒为模板的PCR ...

原因可能有以下情况：
1.水的问题   污染或者非ddwater
2.操作问题   在加对照时 没换枪头或加错了
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19楼2011-10-28 08:51:43
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waldenpond

金虫 (著名写手)
我也出现这种问题。将水用0.22um滤过膜除菌了都没用。下一步打算要么换个实验室，要么在不影响结果分析的前提下直接绕过这个问题。
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20楼2012-07-03 13:05:35
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