| 查看: 3806 | 回复: 9 | |||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
[求助]
向RTPCR高手求助，关于RTPCR的空白对照问题
|
|||
| 各位虫友大家好，我最近初做RTPCR，想请教一下高手是不是用于RTPCR的每对引物使用前都得进行模板为水的空白对照实验，以确定后期熔解曲线的峰是不是出现了特异性扩增，望高手解答，谢谢！！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有251人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请教RNA提取高手：反转录PCR（RT-PCR)中DNA的去除
已经有18人回复
- 求高手指点：RT-PCR的引物设计
已经有18人回复
- 求助！关于RT-PCR的问题！
已经有20人回复
- 求助高手 有关RT-PCR
已经有5人回复
- 关于细菌RT-PCR的一些问题，希望同行探讨一下
已经有4人回复
- ＲＴ－ＰＣＲ问题求助
已经有18人回复
- 【求助/交流】RT-PCR ，内参在哪个步骤添加以及marker何时使用及确定？谢谢
已经有14人回复
- 【求助/交流】RTPCR 内参
已经有4人回复
- 【求助/交流】RT-real time pcr问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】qRT-PCR需要做不加RT的对照吗？
已经有3人回复
- 【求助/交流】RT-PCR总是得不到目的条带
已经有12人回复
- 【求助/交流】Real time RT-PCR 引物设计问题（高悬赏请高手帮忙）
已经有28人回复
beautybanana
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 22
- 应助: 23 (小学生)
- 贵宾: 0.02
- 金币: 2973.8
- 散金: 5088
- 红花: 26
- 帖子: 1694
- 在线: 485.8小时
- 虫号: 1142157
- 注册: 2010-11-09
- 性别: GG
- 专业: 纳米生物学
2楼2011-06-17 18:21:21
3楼2011-06-18 17:04:58
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
yuyan225(金币+7): 谢谢指教，收教了 2011-06-19 11:25:41
dhd997(金币+5): good 2011-06-25 13:34:58
yuyan225(金币+7): 谢谢指教，收教了 2011-06-19 11:25:41
dhd997(金币+5): good 2011-06-25 13:34:58
|
看空白对照是一个办法，不过就算加利模板，在融解曲线里也是可以看出引物二聚体的峰的。就算大小差不多，引物二聚体的结合强度肯定不及PCR产物，Tm值要低些，跟产物相比，出现峰的位置肯定在温度更低的地方。而且一般峰也相对更低（荧光信号相对弱）。 如果有产物，那扩增曲线很早就会出现；如果是30个循环之后才出现扩增曲线，那可能就是引物二聚体了。 空白对照，应该每次PCR里面都加入，可以检查是否有污染及引物二聚体的情况。 楼主在3楼里担心的片段大小与引物二聚体差不多这种情况，应该很难出现吧。两条引物加起来也就50bp不到，而荧光定量PCR的产物一般在150bp到300bp。所以，也可以在PCR之后跑个琼脂糖凝胶电泳，一般能区分开PCR产物和引物二聚体。 |
4楼2011-06-18 22:13:58
5楼2011-06-19 11:27:39
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
6楼2011-06-19 12:06:44
7楼2011-06-20 08:43:15
8楼2011-06-24 15:11:43
beautybanana
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 22
- 应助: 23 (小学生)
- 贵宾: 0.02
- 金币: 2973.8
- 散金: 5088
- 红花: 26
- 帖子: 1694
- 在线: 485.8小时
- 虫号: 1142157
- 注册: 2010-11-09
- 性别: GG
- 专业: 纳米生物学
9楼2011-06-24 17:57:58
beautybanana
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 22
- 应助: 23 (小学生)
- 贵宾: 0.02
- 金币: 2973.8
- 散金: 5088
- 红花: 26
- 帖子: 1694
- 在线: 485.8小时
- 虫号: 1142157
- 注册: 2010-11-09
- 性别: GG
- 专业: 纳米生物学
10楼2011-06-25 00:48:08
10