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xuhua257

木虫 (小有名气)

[求助] 求助高手 有关RT-PCR

如题,之前是内参基因扩不出来,今天重新扩了下,勉强出来一个条带,但有很多拖尾的现象,想求助高手,分析下原因。十分感谢!
前4个泳道是内参基因的,后面几个是要扩的基因,现在是要扩的基因能够P出来但内参的不行,着急啊。且用了35个循环,退火温度为50℃。
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

xuhua257(金币+5): 2011-10-28 08:56:40
xuhua257(金币+5): 2011-10-28 08:57:47
退火温度低了,上到55-60度试试
2楼2011-10-28 00:20:19
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gongeleven at 2011-10-28 00:20:19:
退火温度低了,上到55-60度试试

还可能内参引物不太匹配? 前面引物没用完嘛
3楼2011-10-28 00:21:27
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xuhua257

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gongeleven at 2011-10-28 00:21:27:
还可能内参引物不太匹配? 前面引物没用完嘛

恩 我模板加了2ul 可能太多了
4楼2011-10-28 08:58:32
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amilie030312

金虫 (正式写手)

估计是你温度没找对,我觉得内参基因引物肯定不会有问题啦,那就先想温度了呗,做个梯度,保准没问题。顺便说一句,DNA的扩增用不着那么多循环,如果不是用高保真酶很容易出现错配的。
5楼2011-10-28 13:21:35
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xuhua257

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by amilie030312 at 2011-10-28 13:21:35:
估计是你温度没找对,我觉得内参基因引物肯定不会有问题啦,那就先想温度了呗,做个梯度,保准没问题。顺便说一句,DNA的扩增用不着那么多循环,如果不是用高保真酶很容易出现错配的。

好的 我先试一试 谢谢!
6楼2011-10-28 15:03:47
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