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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助高手 有关RT-PCR
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xuhua257

木虫 (小有名气)

[求助] 求助高手 有关RT-PCR

如题，之前是内参基因扩不出来，今天重新扩了下，勉强出来一个条带，但有很多拖尾的现象，想求助高手，分析下原因。十分感谢！
前4个泳道是内参基因的，后面几个是要扩的基因，现在是要扩的基因能够P出来但内参的不行，着急啊。且用了35个循环，退火温度为50℃。
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1楼 2011-10-27 19:31:11
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

xuhua257(金币+5): 2011-10-28 08:56:40
xuhua257(金币+5): 2011-10-28 08:57:47
退火温度低了，上到55-60度试试
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2楼2011-10-28 00:20:19
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gongeleven at 2011-10-28 00:20:19:
退火温度低了，上到55-60度试试

还可能内参引物不太匹配？ 前面引物没用完嘛
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3楼2011-10-28 00:21:27
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xuhua257

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gongeleven at 2011-10-28 00:21:27:
还可能内参引物不太匹配？ 前面引物没用完嘛

恩 我模板加了2ul 可能太多了
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4楼2011-10-28 08:58:32
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amilie030312

金虫 (正式写手)
估计是你温度没找对，我觉得内参基因引物肯定不会有问题啦，那就先想温度了呗，做个梯度，保准没问题。顺便说一句，DNA的扩增用不着那么多循环，如果不是用高保真酶很容易出现错配的。
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5楼2011-10-28 13:21:35
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xuhua257

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by amilie030312 at 2011-10-28 13:21:35:
估计是你温度没找对，我觉得内参基因引物肯定不会有问题啦，那就先想温度了呗，做个梯度，保准没问题。顺便说一句，DNA的扩增用不着那么多循环，如果不是用高保真酶很容易出现错配的。

好的 我先试一试 谢谢！
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6楼2011-10-28 15:03:47
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