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yuyan225

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[求助] 向RTPCR高手求助，关于RTPCR的空白对照问题

各位虫友大家好，我最近初做RTPCR，想请教一下高手是不是用于RTPCR的每对引物使用前都得进行模板为水的空白对照实验，以确定后期熔解曲线的峰是不是出现了特异性扩增，望高手解答，谢谢！！

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1楼2011-06-17 17:10:30

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yuyan225

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那如何确定在PCR的体系里就只有有引物二聚体，当cDNA里扩不出相应的片段是万一有了引物二聚体，而我的片段条带大小又与引物二聚体大小差不多，如果出现了引物二聚体熔解曲线也有峰，那么我做个水位模板的空白对照就可以看出引物二聚体的情况，我是这么想的，望高手继续指点~~

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3楼2011-06-18 17:04:58

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yuyan225

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引用回帖:

Originally posted by 西瓜 at 2011-06-18 22:13:58:
看空白对照是一个办法，不过就算加利模板，在融解曲线里也是可以看出引物二聚体的峰的。就算大小差不多，引物二聚体的结合强度肯定不及PCR产物，Tm值要低些，跟产物相比，出现峰的位置肯定在温度更低的地方。而且 ...

还有一个问题在想您请教，空白对照要不要每对引物都加，或者每个板设一个空白对照就够了？

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5楼2011-06-19 11:27:39

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