Originally posted by yuyan225 at 2011-06-17 17:10:30:
各位虫友大家好，我最近初做RTPCR，想请教一下高手是不是用于RTPCR的每对引物使用前都得进行模板为水的空白对照实验，以确定后期熔解曲线的峰是不是出现了特异性扩增，望高手解答，谢谢！！

Originally posted by 西瓜 at 2011-06-18 22:13:58:
看空白对照是一个办法，不过就算加利模板，在融解曲线里也是可以看出引物二聚体的峰的。就算大小差不多，引物二聚体的结合强度肯定不及PCR产物，Tm值要低些，跟产物相比，出现峰的位置肯定在温度更低的地方。而且 ...

Originally posted by yuyan225 at 2011-06-19 11:27:39:
还有一个问题在想您请教，空白对照要不要每对引物都加，或者每个板设一个空白对照就够了？

Originally posted by beautybanana at 2011-06-17 18:21:21:
空白对照是看污染情况，溶解曲线是看扩增的特异性（染料法）

Originally posted by jiangyhai at 2011-06-24 15:11:43:
是引物二聚体还是目的条带可以通过电泳来判断，电泳时间足够长时，引物二聚体会变模糊而目的条带不会。

Originally posted by beautybanana at 2011-06-24 17:57:58:
引物二聚体可以直接根据溶解曲线峰所对应的温度做出判断。