应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 向RTPCR高手求助，关于RTPCR的空白对照问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 3932  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yuyan225

金虫 (小有名气)

[求助] 向RTPCR高手求助，关于RTPCR的空白对照问题

各位虫友大家好，我最近初做RTPCR，想请教一下高手是不是用于RTPCR的每对引物使用前都得进行模板为水的空白对照实验，以确定后期熔解曲线的峰是不是出现了特异性扩增，望高手解答，谢谢！！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-17 17:10:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beautybanana

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 费心了！不过有没有办法区分引物二聚体和错配扩增的峰呢？请教下。 2011-06-24 20:40:38
引用回帖:
Originally posted by jiangyhai at 2011-06-24 15:11:43:
是引物二聚体还是目的条带可以通过电泳来判断，电泳时间足够长时，引物二聚体会变模糊而目的条带不会。

引物二聚体可以直接根据溶解曲线峰所对应的温度做出判断。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-06-24 17:57:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
yuyan225(金币+3): 2011-06-18 16:59:44
西瓜(金币+3): 鼓励应助 2011-06-18 21:53:39
引用回帖:
Originally posted by yuyan225 at 2011-06-17 17:10:30:
各位虫友大家好，我最近初做RTPCR，想请教一下高手是不是用于RTPCR的每对引物使用前都得进行模板为水的空白对照实验，以确定后期熔解曲线的峰是不是出现了特异性扩增，望高手解答，谢谢！！

空白对照是看污染情况，溶解曲线是看扩增的特异性（染料法）
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-17 18:21:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyan225

金虫 (小有名气)
那如何确定在PCR的体系里就只有有引物二聚体，当cDNA里扩不出相应的片段是万一有了引物二聚体，而我的片段条带大小又与引物二聚体大小差不多，如果出现了引物二聚体熔解曲线也有峰，那么我做个水位模板的空白对照就可以看出引物二聚体的情况，我是这么想的，望高手继续指点~~
赞一下 回复此楼
3楼2011-06-18 17:04:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
yuyan225(金币+7): 谢谢指教，收教了 2011-06-19 11:25:41
dhd997(金币+5): good 2011-06-25 13:34:58
看空白对照是一个办法，不过就算加利模板，在融解曲线里也是可以看出引物二聚体的峰的。就算大小差不多，引物二聚体的结合强度肯定不及PCR产物，Tm值要低些，跟产物相比，出现峰的位置肯定在温度更低的地方。而且一般峰也相对更低（荧光信号相对弱）。

如果有产物，那扩增曲线很早就会出现；如果是30个循环之后才出现扩增曲线，那可能就是引物二聚体了。

空白对照，应该每次PCR里面都加入，可以检查是否有污染及引物二聚体的情况。

楼主在3楼里担心的片段大小与引物二聚体差不多这种情况，应该很难出现吧。两条引物加起来也就50bp不到，而荧光定量PCR的产物一般在150bp到300bp。所以，也可以在PCR之后跑个琼脂糖凝胶电泳，一般能区分开PCR产物和引物二聚体。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-06-18 22:13:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂求助（生物与医药） +4 @6952 2026-04-06 4/200 2026-04-07 16:16 by 懒虫儿坤
[考研] 一志愿南京航空航天大学 材料与化工329分求调剂 +9 Mr. Z 2026-04-05 9/450 2026-04-07 15:30 by 尽舜尧1
[考研] 085600材料与化工301分求调剂院校 +25 刺痛jk 2026-04-06 26/1300 2026-04-07 15:07 by -迷了路啊路
[考研] 化工调剂303分，过四级 +34 栖梧待风 2026-04-02 34/1700 2026-04-07 12:30 by 1018329917
[考研] 318求调剂 +12 ykyhsa 2026-04-05 14/700 2026-04-06 17:46 by fuyu_
[考研] 专硕304找调剂，一线城市最好 +3 李lsl李 2026-04-05 3/150 2026-04-06 12:16 by ffffjjjj
[考研] 复试调剂 +5 asdasdassda 2026-04-05 5/250 2026-04-06 09:32 by dongzh2009
[考研] 生物学308分求调剂（一志愿华东师大） +8 相信必会光芒万� 2026-04-05 10/500 2026-04-05 12:19 by Hdyxbekcb
[考研] 085602调剂 初试总分335 +12 19123253302 2026-04-04 12/600 2026-04-05 08:08 by 544594351
[考研] 324求调剂 +9 想上学求调 2026-04-03 9/450 2026-04-04 23:57 by 果冻大王
[考研] 283求调剂 +4 mcbbc 2026-04-03 5/250 2026-04-04 20:51 by imissbao
[论文投稿] 求文献 5+3 ys879651$ 2026-04-02 3/150 2026-04-04 17:22 by bobvan
[考研] 22408求调剂 354分 可跨专业 +3 hannnnnnn 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:35 by 土木硕士招生
[考研] 387求调剂 +4 爱吃片豆土 2026-04-03 5/250 2026-04-04 08:10 by 岸上的一条鱼
[考研] 265求调剂 +17 林深温澜 2026-04-01 20/1000 2026-04-04 01:09 by userper
[考研] 357求调剂 +13 1050389037 2026-04-03 13/650 2026-04-03 22:27 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +3 usbdndj 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:10 by dxiaoxin
[考研] 求调剂22408 288分 +5 new382 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:13 by 醉在风里
[考研] 295求调剂 +7 愿旅途永远坦然 2026-04-02 7/350 2026-04-03 08:22 by fangshan711
[考研] 312求调剂 +4 赊月色 2026-04-02 5/250 2026-04-03 08:21 by fangshan711
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭