应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教两条片段通过PCR桥接扩增的方法
111/2返回列表12下一页
查看: 3187  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

noheartman

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教两条片段通过PCR桥接扩增的方法 已有9人参与

我有两段DNA，其中一段1.5Kb,另外一段只有60bp,想通过PCR桥接的方法把它们连接起来再进行扩增，想得到1500+60的片段，请教大虾，该怎么做才好。本来计划通过单独的PCR加酶切位点扩增后，胶回收连接起来，但60bp的DNA回收起来有困难，要不有好的回收方法也可以，请赐教。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-27 21:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyw1989960

木虫 (正式写手)

快乐家族二十八
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-07-27 23:43:27
第二个片段也太小了，做融合PCR也不好做，1500与1500+60估计电泳也看不出区别
赞一下(1人) 回复此楼
快乐家族
2楼2010-07-27 21:59:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunyongle1

木虫 (正式写手)
★
noheartman(金币+1): 2010-07-28 15:25:09
lstt09nk(金币+1):正解~~ 2010-07-29 09:34:37
确实不太好办，你干脆直接把60bp合成引物算了。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-07-27 23:14:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junior850621

铁杆木虫 (著名写手)
noheartman(金币+1): 2010-07-28 15:25:02
同意二楼
回复此楼
4楼2010-07-28 00:16:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
noheartman(金币+1): 2010-07-28 15:24:59
引用回帖:
Originally posted by sunyongle1 at 2010-07-27 23:14:27:
确实不太好办，你干脆直接把60bp合成引物算了。

这个才是正解！
回复此楼
5楼2010-07-28 11:31:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
noheartman(金币+1): 2010-07-28 15:24:48
同意直接合成一条八十几个碱基的长引物（与长序列有20多个bp的重叠区），然后跟长序列上的引物PCR就可以。。。
    短片段回收 直接乙醇沉淀就行。。。
赞一下 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
6楼2010-07-28 11:36:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

steamsn

金虫 (小有名气)
noheartman(金币+1): 2010-07-28 15:24:54
同意楼上的意见，直接将其作为引物的来进行PCR
赞一下 回复此楼
我命由我不由天
7楼2010-07-28 11:38:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

noheartman

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-07-28 11:31:03:


这个才是正解！

80多个碱基的引物，我以前没有做过，那Tm值会超高，那是不是只要两步法呢，退火和延伸合并成一步呢？
赞一下 回复此楼
8楼2010-07-28 15:32:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxping11230

铁虫 (小有名气)
如果模板是质粒的话，80多个碱基的引物可以与30多的常规引物搭配的，我经常这样做 没问题。而且简单，只是扩增时最好用高保真酶！
赞一下 回复此楼
快乐的科研
9楼2010-07-28 17:24:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxping11230

铁虫 (小有名气)
没必要两步法，就常规PCR
赞一下 回复此楼
快乐的科研
10楼2010-07-28 17:25:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 noheartman 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] [复试调剂]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 材料专硕326求调剂 +5 墨煜姒莘 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:30 by 木瓜膏
[文学芳草园] 伙伴们，祝我生日快乐吧 +17 myrtle 2026-03-10 26/1300 2026-03-16 18:32 by 青橙Ln
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +8 一鸭鸭哟 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:35 by 沐霖12138
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 材料与化工专硕调剂 +3 heming3743 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:05 by peike
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 0856材料与化工309分求调剂 +6 ZyZy…… 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:38 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +3 番茄头--- 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕288分求调剂 一志愿211 +4 在家想你 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:49 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 268求调剂 +4 好运连绵不绝 2026-03-12 4/200 2026-03-13 10:45 by hyswxzs
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭