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noheartman

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教两条片段通过PCR桥接扩增的方法 已有9人参与

我有两段DNA,其中一段1.5Kb,另外一段只有60bp,想通过PCR桥接的方法把它们连接起来再进行扩增,想得到1500+60的片段,请教大虾,该怎么做才好。本来计划通过单独的PCR加酶切位点扩增后,胶回收连接起来,但60bp的DNA回收起来有困难,要不有好的回收方法也可以,请赐教。
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jasco

木虫 (正式写手)

noheartman(金币+1): 2010-07-28 15:24:59
引用回帖:
Originally posted by sunyongle1 at 2010-07-27 23:14:27:
确实不太好办,你干脆直接把60bp合成引物算了。

这个才是正解!
5楼2010-07-28 11:31:03
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hyw1989960

木虫 (正式写手)

快乐家族二十八


scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-07-27 23:43:27
第二个片段也太小了,做融合PCR也不好做,1500与1500+60估计电泳也看不出区别
快乐家族
2楼2010-07-27 21:59:29
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sunyongle1

木虫 (正式写手)


noheartman(金币+1): 2010-07-28 15:25:09
lstt09nk(金币+1):正解~~ 2010-07-29 09:34:37
确实不太好办,你干脆直接把60bp合成引物算了。
3楼2010-07-27 23:14:27
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

noheartman(金币+1): 2010-07-28 15:24:48
同意直接合成一条八十几个碱基的长引物(与长序列有20多个bp的重叠区),然后跟长序列上的引物PCR就可以。。。
    短片段回收 直接乙醇沉淀就行。。。
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
6楼2010-07-28 11:36:58
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