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PCR产物凝胶回收、酶切等问题请教
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我提取的基因组DNA做的PCR，产物跑电泳条带偶尔出现比较亮和粗的。同样的平行试验效果也经常不太一样。我割胶切下来后收集了多次才用试剂盒做的回收，得到的回收产物DNA量还是比较少的，跑了电泳有条带，就是比较淡，见图1.取了其中2个样品的回收产物做了酶切，用的是MspI和RsuRI 在37°C水浴反应了6个小时。并没有得到预先的多个条带，见图2，前2个是酶切反应后结果，第三个是MARKER 图1  图2 |
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2楼2011-11-12 17:37:49
mamadexiao
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
树宝宝zyx(金币+10): 谢谢你，说得很详细！ 2011-11-14 09:54:15
wanhscn(金币+4): good！再接再厉！ 2011-11-14 16:38:30
树宝宝zyx(金币+10): 谢谢你，说得很详细！ 2011-11-14 09:54:15
wanhscn(金币+4): good！再接再厉！ 2011-11-14 16:38:30
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嗯，有个问题，你酶切前后片段差多少 另外，你的条带这么散，你怎么确定就是你要的大小 还有你的marker是多大的 建议，要是第一次PCR得到的产物丰度较低，建议可以把这个产物做模板，回收，纯化后，再次PCR 然后双酶切 双酶切，我一般做3小时 然后双酶切 的结果跑电泳时，建议带上原来的回收PCR产物，这样有个对照 （如果前后差的碱基数多的话，少了跑普通琼脂糖一般分不开） 然后，如果片段比较小的话，建议加大琼脂糖浓度。。。 延长跑胶时间，MARKER都没分开，说不清楚。 |
树宝宝zyx3楼2011-11-12 21:28:36
4楼2011-11-14 10:02:20
5楼2011-11-14 19:40:16
Arrennew
铁杆木虫 (正式写手)
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6楼2011-11-14 21:28:17
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7楼2012-02-11 11:35:24
8楼2012-03-21 18:35:31
