| 查看: 2277 | 回复: 7 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
PCR产物凝胶回收、酶切等问题请教
|
||
我提取的基因组DNA做的PCR，产物跑电泳条带偶尔出现比较亮和粗的。同样的平行试验效果也经常不太一样。我割胶切下来后收集了多次才用试剂盒做的回收，得到的回收产物DNA量还是比较少的，跑了电泳有条带，就是比较淡，见图1.取了其中2个样品的回收产物做了酶切，用的是MspI和RsuRI 在37°C水浴反应了6个小时。并没有得到预先的多个条带，见图2，前2个是酶切反应后结果，第三个是MARKER 图1  图2 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有55人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于PCR引物设计及添加酶切位点和保护碱基的问题
已经有4人回复
- PCR ， 双酶切，连接问题
已经有17人回复
- 关于切胶回收后有质粒污染和拼接PCR涂抹装条带的问题，有点长，呵呵
已经有13人回复
- 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
已经有8人回复
- pcr产物问题请教大家
已经有5人回复
- 关于PCR产物与pMD 19Tsimple连接的问题
已经有19人回复
- pcr出现问题，请教
已经有7人回复
- 【求助/交流】PCR产物连接请教！
已经有5人回复
- 【求助/交流】PCR产物做克隆，测序出现问题。
已经有13人回复
- 【求助/交流】PCR产物酶切后，电泳时遇到的的问题，真心求教！
已经有9人回复
- 【求助/交流】请教关于PCR的问题！！！
已经有12人回复
- 【求助/交流】问个问题,测PCR产物序列的时候会不会测出引物的序列?
已经有16人回复
送鲜花一朵 
5楼2011-11-14 19:40:16
mamadexiao
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 53 (初中生)
- 金币: 5603.5
- 散金: 100
- 红花: 7
- 帖子: 418
- 在线: 78.8小时
- 虫号: 576831
- 注册: 2008-06-21
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
树宝宝zyx(金币+10): 谢谢你，说得很详细！ 2011-11-14 09:54:15
wanhscn(金币+4): good！再接再厉！ 2011-11-14 16:38:30
树宝宝zyx(金币+10): 谢谢你，说得很详细！ 2011-11-14 09:54:15
wanhscn(金币+4): good！再接再厉！ 2011-11-14 16:38:30
|
嗯，有个问题，你酶切前后片段差多少 另外，你的条带这么散，你怎么确定就是你要的大小 还有你的marker是多大的 建议，要是第一次PCR得到的产物丰度较低，建议可以把这个产物做模板，回收，纯化后，再次PCR 然后双酶切 双酶切，我一般做3小时 然后双酶切 的结果跑电泳时，建议带上原来的回收PCR产物，这样有个对照 （如果前后差的碱基数多的话，少了跑普通琼脂糖一般分不开） 然后，如果片段比较小的话，建议加大琼脂糖浓度。。。 延长跑胶时间，MARKER都没分开，说不清楚。 |
3楼2011-11-12 21:28:36
4楼2011-11-14 10:02:20
Arrennew
铁杆木虫 (正式写手)
- MolEPI: 4
- 应助: 19 (小学生)
- 金币: 7391.5
- 红花: 2
- 帖子: 301
- 在线: 122.9小时
- 虫号: 322853
- 注册: 2007-03-12
- 性别: GG
- 专业: 林木遗传育种学
6楼2011-11-14 21:28:17