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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr出现问题，请教
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461153539

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr出现问题，请教

这几次pcr产物的电泳图，上样孔都会很亮，而且从上样孔开始会有白色的弥散，一直拖到我们的目的条带长度左右，这是今天做的PCR产物电泳图，上样孔正常了，但是目的条带附近又是一段弥散，看得到条带的是质粒的pcr产物，是产物降解了吗？会不会是试剂污染了呢？（目标片段在720bp）
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1楼 2011-05-02 19:30:36
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郝钊

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不知道你的上样量如何，你阳性对照亮度都那么低。你最好把PCR的体系和过程详细说一下。
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2楼2011-05-02 19:52:01
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461153539

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 郝钊 at 2011-05-02 19:52:01:
不知道你的上样量如何，你阳性对照亮度都那么低。你最好把PCR的体系和过程详细说一下。

体系和过程都很成熟了的。。最近几次就这样了。不解
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3楼2011-05-02 20:07:54
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-05-03 00:39:40
是不是引物有问题
这根本就是没扩出来
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4楼2011-05-02 22:10:09
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yangqq8282

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-05-03 10:40:47
PCR失败了，检查引物还有反应条件
加样孔有是因为样品没有纯化
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5楼2011-05-03 10:33:39
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 不错 2011-05-03 13:28:11
个人感觉是Tm值的问题，可以做一个温度梯度。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-05-03 11:56:50
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amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): Good~ 2011-05-03 17:59:33
461153539(金币+1): 2011-05-03 19:24:13
没看到你上样孔在哪里啊，如果上样孔比较亮应该是有蛋白的残留，我记得是加SDS除去还是加啥除去来着，这个拖带太严重了，首先Marker跑的就不是很好，说明电泳跑的有些问题，换点新鲜的缓冲液重新跑下吧。另外就右侧的看到有一点点条带，但是又有很严重的拖带，要是我就换高点温度再跑下，还不行就直接换引物吧。
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7楼2011-05-03 16:26:06
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eeefff1987

新虫 (初入文坛)
模板浓度
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8楼2011-05-04 16:38:53
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