应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教关于PCR的问题！！！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/2返回列表12下一页
查看: 1482  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ottolzm

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请教关于PCR的问题！！！ 已有9人参与

最近做了一下PCR 发现自己的PCR没有结果 想寻求以下原因 是引物的问题 还是模板的问题  原先的引物为21bp  15bp  (没加酶切位点)，21bp  19bp (没加酶切位点) 这样的酶切位点是不是太短了  用不用再加长点（待扩增片段 第一段长 798bp  第二段 831bp）还有我现在用的是BBI 公司的Taq DNA polymerase 模板量为 0.5 微升 做了一次 扩增出来的是1500bp 的条带  加到1微升的时候 没有扩增出来  实验室有人建议加到3微升试试 不知道坛子里的各位大侠能否帮帮忙 优化一下反应条件。小弟在此 谢谢各位！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-05-24 09:05:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-05-24 12:17:02
引物长度不是关键，主要看tm值，是否有二级结构等，

扩出来1500bp应该是非特异性扩增产物，所以可以提高引物tm值，
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-05-24 11:03:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶的量0.5已经够用了，主要还是PCR退火温度
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-05-24 11:18:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ottolzm

木虫 (正式写手)
呵呵 谢谢 楼上的两位大侠  我已经做了温度梯度  在50度的时候 非特异性条带很多 也包括我想要的 但是当我的Tm调节到68度的时候 什么都没有 (引物带酶切位点的Tm为69.8 而不带酶切位点的Tm为64.7)  请教一下各位大侠 能否在提高退火温度 还是 重新设计引物？
赞一下 回复此楼
4楼2010-05-25 08:45:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dujing19841014

铁虫 (小有名气)
★
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-25 15:23:55
主要是退火温度，你可以在50度左右在做梯度试试，还有就是循环数，你可以在增加一些。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-05-25 11:37:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天逸生命

新虫 (初入文坛)

PCR梯度的温度设置后，是不是温度越高特异性越强

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
谢谢牛人的帮助
回复此楼
6楼2010-05-25 21:50:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzf0411

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
延伸时间不要太长
还是要提一下退火温度
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-05-25 22:41:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nklyw

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
还是改变一下退火温度吧
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-05-25 23:10:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ottolzm

木虫 (正式写手)
谢谢楼上的各位大侠和好心人
赞一下 回复此楼
9楼2010-05-26 14:25:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhmy26

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
既然你已经可以克隆出来多条非特异性条带，其中包括你所需要的。那就将你需要的条带纯化出来，作为模板，重新PCR不就行了？
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2010-05-26 15:42:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ottolzm 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化工求调剂！ +4 RichLi_ 2026-04-06 4/200 2026-04-06 13:12 by 尊的很想上学
[考研] 考研调剂 +5 美丽的youth_ 2026-04-04 6/300 2026-04-06 06:57 by houyaoxu
[考研] 315求调剂 +14 欣喜777 2026-04-04 15/750 2026-04-06 06:25 by houyaoxu
[考研] 294求调剂 +4 Grey_Ey 2026-04-01 5/250 2026-04-05 23:05 by Grey_Ey
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-02 13/650 2026-04-04 20:49 by 蓝云思雨
[考研] 085601，一志愿厦大334复试被刷求调剂 +13 曾仰之 2026-04-03 15/750 2026-04-04 20:13 by dongzh2009
[考研] 一志愿0817化学工程与技术，求调剂 +24 我不是只因 2026-04-02 28/1400 2026-04-04 15:15 by dongzh2009
[考研] 一志愿沪985，326分求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-03 3/150 2026-04-04 11:16 by 悲伤的芋头
[考研] 282求调剂 +20 ycy1201 2026-04-01 22/1100 2026-04-04 00:42 by userper
[考研] 322求调剂 +6 FZAC123 2026-04-03 6/300 2026-04-03 22:23 by 科研小专家
[考研] 372分材料与化工（085600）一志愿湖南大学求调剂 +3 蓝笺片 2026-04-03 4/200 2026-04-03 17:58 by Jimmyandyou
[考研] 专硕085601求调剂 +7 suyifei 2026-04-03 8/400 2026-04-03 14:00 by 欣喜777
[硕博家园] 求老师收留 +9 lllq123 2026-04-03 9/450 2026-04-03 13:48 by 呼吸都是减肥
[考研] 初试成绩337找调剂 +3 ??? ?. ? 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:43 by 土木硕士招生
[考研] 372分材料与化工（085600）一志愿湖南大学求调剂 +5 蓝笺片 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:37 by dongzh2009
[考研] 318求调剂，计算材料方向 +10 吸喵有害笙命 2026-04-01 11/550 2026-04-02 16:29 by oooqiao
[考研] 一志愿厦门大学化学工程（专硕）-数二英二406分-求调剂 +5 厦大化工 2026-04-01 5/250 2026-04-02 10:03 by jp9609
[考研] 考研调剂 +12 Amber00 2026-03-31 12/600 2026-04-02 09:04 by sanrepian
[考研] 350求调剂 +7 阿佳～ 2026-03-31 7/350 2026-04-01 16:12 by yanflower7133
[考研] 土木304求调剂 +5 顶级擦擦 2026-03-31 5/250 2026-04-01 08:15 by fdcxdystjk￥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭