| 查看: 2418 | 回复: 4 | |||
yeedro铁杆木虫 (著名写手)
|
[交流]
【求助/交流】向各位大虾请教“易错PCR” 已有4人参与
|
|
第一次做“易错PCR”，问题可能有些幼稚，请别见笑。 主要是，在做镁离子调节时，以怎么个梯度来进行比较好呢？0.5mmol逐渐增加，还是怎样呢？ 关于这种PCR方法，大家有什么好的建议吗？最需要注意什么呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有51人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 易错PCR效果
已经有7人回复
姜大磊
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3645.9
- 散金: 236
- 红花: 1
- 帖子: 188
- 在线: 210.1小时
- 虫号: 868835
- 注册: 2009-10-11
- 性别: GG
- 专业: 生物技术
2楼2010-05-06 12:02:36
3楼2010-05-06 12:14:31
4楼2011-04-21 10:48:45
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
|
我了解也不多，google了下，嘿嘿~ http://bbs.bbioo.com/thread-56842-1-1.html 易错PCR是在采用DNA聚合酶进行目的基因扩增时，通过调整反应条件， 如提高镁离子浓度、加入锰离子、改变体系中四种的dNTPs浓度或运用低保真度 DNA聚合酶等，来改变扩增过程中的突变频率，从而以一定的频率向目的基因中随 机引入突变，获得蛋白质分子的随机突变体。其关键在于对合适突变频率的选择， 突变频率太高会导致绝大多数突变为有害突变，无法筛选到有益突变;突变频率太 低则会导致文库中全是野生型群体。理想的碱基置换率和易错的最佳条件主要依赖 于突变的DNA片段的长度。通常，经一次突变的基因很难获得满意的结果，由此 发展出连续易错 PCR(sequentialermr-PronePCR)策略。即将一次扩增得到的有益突 变基因作为下一次扩增的模板，连续反复地进行随机诱变，使每一次扩增得到的正 向突变累积而产生重要的有益突变。由于易错PCR涉及的遗传变化只发生在单一 分子内部，故属于无性进化 (asexualevolution)。它虽然可以有效的产生突变，且操 作方法简单，但其一般只适用较小的基因片段，且突变碱基中转换高于颠换，应用 范围较为有限。 |
5楼2011-04-21 11:50:56
50