应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教关于PCR的问题！！！
51/1返回列表
查看: 1780  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ottolzm

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请教关于PCR的问题！！！ 已有9人参与

最近做了一下PCR 发现自己的PCR没有结果 想寻求以下原因 是引物的问题 还是模板的问题  原先的引物为21bp  15bp  (没加酶切位点)，21bp  19bp (没加酶切位点) 这样的酶切位点是不是太短了  用不用再加长点（待扩增片段 第一段长 798bp  第二段 831bp）还有我现在用的是BBI 公司的Taq DNA polymerase 模板量为 0.5 微升 做了一次 扩增出来的是1500bp 的条带  加到1微升的时候 没有扩增出来  实验室有人建议加到3微升试试 不知道坛子里的各位大侠能否帮帮忙 优化一下反应条件。小弟在此 谢谢各位！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-05-24 09:05:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzf0411

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
延伸时间不要太长
还是要提一下退火温度
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-05-25 22:41:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

jasco

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-05-24 12:17:02
引物长度不是关键，主要看tm值，是否有二级结构等，

扩出来1500bp应该是非特异性扩增产物，所以可以提高引物tm值，
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-05-24 11:03:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶的量0.5已经够用了，主要还是PCR退火温度
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-05-24 11:18:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ottolzm

木虫 (正式写手)
呵呵 谢谢 楼上的两位大侠  我已经做了温度梯度  在50度的时候 非特异性条带很多 也包括我想要的 但是当我的Tm调节到68度的时候 什么都没有 (引物带酶切位点的Tm为69.8 而不带酶切位点的Tm为64.7)  请教一下各位大侠 能否在提高退火温度 还是 重新设计引物？
赞一下 回复此楼
4楼2010-05-25 08:45:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 基金啊基金 +3 longfie172 2026-08-20 3/150 2026-08-21 00:04 by wuchongjun
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +8 大萍1987 2026-08-20 10/500 2026-08-20 21:48 by 大萍1987
[基金申请] 言之凿凿，明天官网会通知放榜？ +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 22/1100 2026-08-20 17:03 by yaoyewhu2008
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭