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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物酶切后，电泳时遇到的的问题，真心求教！
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波澜不惊

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】PCR产物酶切后，电泳时遇到的的问题，真心求教！ 已有8人参与

我的PCR产物是250bp的片段，并在两端加了酶切位点：Xba I和Sac I。
然后我用OMEGA纯化试剂盒纯化后，进行双酶切，切后电泳很奇怪，如图：

在酶切之后，我又纯化后再跑电泳，又正常了。有很清晰的条带。用的酶是宝生物的，T Buffer并加了BSA。 这个体系我用问切过质粒很正常。

求教:是什么原因电泳跑成这样？这样的酶切产物两端切没切开？能不能用于后续的连接？
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1楼 2010-07-03 20:24:10
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lmzxcom1(金币+1):鼓励积极交流！ 2010-07-03 21:21:35
胶制的不好,电压也不太稳
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2楼2010-07-03 21:19:24
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zemin_fang

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
上样孔超载了
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3楼2010-07-03 21:25:35
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skyqiuqiu119

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
从表面来看，就是跑的太快了，电压高了或者不稳定，出现拖尾现象。可能这是偶尔现象，再试一次就应该差不多。
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哎哟~可爱QQ~不错哦~~
4楼2010-07-03 22:23:12
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波澜不惊

铁虫 (初入文坛)
这不是一次的现象，重复几次了，都是这样，应该也不是电压和胶的问题，因为我们一直都在用，别的也都很正常。
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5楼2010-07-03 23:59:36
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波澜不惊

铁虫 (初入文坛)
我的上样量是5微升。点样孔点20微升的酶切体系都是没问题的。
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6楼2010-07-04 00:03:36
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yanglanfen

金虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-04 08:48:58
从表面来看，就是跑的太快了，电压高了或者不稳定，出现拖尾现象。可能这是偶尔现象，再试一次就应该差不多。
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7楼2010-07-04 00:08:53
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-04 08:48:47
酶切后点检测2ul就足够了，还有mark条带都能跑成这样，应该是胶或是电泳的原因
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
8楼2010-07-04 00:10:19
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
您好，我想咨询一下，您的PCR体系是怎样的？酶切时是酶切了多少量的PCR产物啊？我的PCR产物酶切时从来没有这么亮过
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9楼2013-03-23 10:31:22
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zzzaazzzzz

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
图中可以很明显从MARKER看出你的凝胶制得不匀,靠近边缘的条带出现弧线，表明电压不稳。电泳缓冲液使用太久也会出现这样的问题
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10楼2013-03-23 16:21:19
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