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1楼2011-05-04 08:32:32

天使托

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★ ★ ★
dhd997(金币+3): 一条一金币，呵呵 2011-05-04 11:05:32
794378428(金币+1): 2011-05-04 21:03:10
794378428(金币+1): 2011-05-04 21:03:33

1：连接体系的问题，连接时间呢？
2：质粒和你的目的基因酶切是否完全?
3:感受态细胞又如何？

Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!

2楼2011-05-04 08:52:31

zlu520

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★ ★
dhd997(金币+2): 有道理 2011-05-04 11:05:48

酶如果正确的话，条件一定要合适啊，时间等。。

无完人！

3楼2011-05-04 10:20:07

liulinlin123

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★ ★
dhd997(金币+2): 对啊 2011-05-04 11:05:57

可以考虑一下链接时增加热击 65度5min

4楼2011-05-04 10:30:56

gppwfh

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★ ★
dhd997(金币+2): 经验？ 2011-05-04 11:06:09

你做pcr的时候用的聚合酶是？如果是高保真酶，3‘没有A，当然和simple连不上了。

5楼2011-05-04 10:40:17

794378428

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引用回帖:

Originally posted by gppwfh at 2011-05-04 10:40:17:
你做pcr的时候用的聚合酶是？如果是高保真酶，3‘没有A，当然和simple连不上了。

是Taq酶，不需要加A吧

6楼2011-05-04 21:05:02

794378428

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引用回帖:

Originally posted by 天使托 at 2011-05-04 08:52:31:
1：连接体系的问题，连接时间呢？
2：质粒和你的目的基因酶切是否完全?
3:感受态细胞又如何？

连接时间有影响吗，我的目的基因950多bp，那个试剂盒上说连接30min可以，我连接了3h

7楼2011-05-04 21:06:49

天使托

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引用回帖:

Originally posted by 794378428 at 2011-05-04 21:06:49:
连接时间有影响吗，我的目的基因950多bp，那个试剂盒上说连接30min可以，我连接了3h

你是用连接试剂盒连的？
一般手连就可以了，我们一般16度过夜连接。。。。

Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!

8楼2011-05-05 09:34:48

xiaoyu1014126

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dhd997(金币+2): 鼓励啊 2011-05-05 16:49:45

能够影响的因素太多了
你的PCR产物是用什么酶扩出来的？如果没有A尾巴那肯定连不上的
其他因素：感受态不行，抗生素用错，等等

9楼2011-05-05 15:40:02

aegeand

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10楼2011-05-08 18:27:16