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wanghr595

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】基因连上PMD-18T,结果PCR分子量不对已有10人参与

基因应该是连上了的,结果挑菌落PCR分子量不对,目的基因1300,PCR条带只有900多,TaqPCR之后做了胶回收的,应该没有杂带的,实在是搞不懂啊!盼望哪位大侠帮忙,万分感谢了!
我酶切后的片段还是900左右,又挑了其他的一些菌落,结果还不行!搞不懂,应该很好连的啊,真的很愁人。

[ Last edited by wanghr595 on 2010-8-15 at 16:41 ]
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ben1147

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
提质粒酶切的结果呢?
先测序吧,看看是怎么回事
2楼2010-08-12 22:22:21
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月月大可

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果不是使用simple可以提质粒做双酶切看看
3楼2010-08-13 00:42:07
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xiaoru2010


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wanghr595 at 2010-08-12 21:04:55:
基因应该是连上了的,结果挑菌落PCR分子量不对,目的基因1300,PCR条带只有900多,TaqPCR之后做了胶回收的,应该没有杂带的,实在是搞不懂啊!盼望哪位大侠帮忙,万分感谢了!

我的片段也是明明1300,让公司做的克隆测序,结果给我的片段只有870,能找到引物,但不是我要的片段……无语
4楼2010-08-13 09:13:53
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~!


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
重新再做一遍了……
5楼2010-08-13 09:17:05
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
连接上后有可能给重组掉了~换个菌株试一下
6楼2010-08-13 16:02:55
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空谷幽风

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
首先酶切验证一下同时看一下质粒上有没有引物的其他结合位点
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
7楼2010-08-13 20:10:05
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清新栀子


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你用的什么牌子的T载体啊,我用的宝生物的simpleT载,假阳性特别多,我都不敢往下面做了,崩溃。呜呜呜,有人可以推荐个好点的simple T 载体吗?
8楼2010-08-14 16:45:14
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大白菜123789

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
PMD18-T,好使
9楼2010-08-14 22:23:09
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sqhnsd

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 清新栀子 at 2010-08-14 16:45:14:
你用的什么牌子的T载体啊,我用的宝生物的simpleT载,假阳性特别多,我都不敢往下面做了,崩溃。呜呜呜,有人可以推荐个好点的simple T 载体吗?

progma的不错,就是贵点。还有Tiangen,transgen的也不错,物美价廉
10楼2010-08-15 08:23:59
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