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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因连上PMD-18T，结果PCR分子量不对
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wanghr595

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】基因连上PMD-18T，结果PCR分子量不对 已有10人参与

基因应该是连上了的，结果挑菌落PCR分子量不对，目的基因1300，PCR条带只有900多，TaqPCR之后做了胶回收的，应该没有杂带的，实在是搞不懂啊！盼望哪位大侠帮忙，万分感谢了！
我酶切后的片段还是900左右，又挑了其他的一些菌落，结果还不行！搞不懂，应该很好连的啊，真的很愁人。

[ Last edited by wanghr595 on 2010-8-15 at 16:41 ]
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1楼 2010-08-12 21:04:55
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
提质粒酶切的结果呢？
先测序吧，看看是怎么回事
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2楼2010-08-12 22:22:21
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月月大可

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果不是使用simple可以提质粒做双酶切看看
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3楼2010-08-13 00:42:07
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xiaoru2010

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wanghr595 at 2010-08-12 21:04:55:
基因应该是连上了的，结果挑菌落PCR分子量不对，目的基因1300，PCR条带只有900多，TaqPCR之后做了胶回收的，应该没有杂带的，实在是搞不懂啊！盼望哪位大侠帮忙，万分感谢了！

我的片段也是明明1300，让公司做的克隆测序，结果给我的片段只有870，能找到引物，但不是我要的片段……无语
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4楼2010-08-13 09:13:53
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
重新再做一遍了……
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5楼2010-08-13 09:17:05
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
连接上后有可能给重组掉了~换个菌株试一下
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6楼2010-08-13 16:02:55
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先酶切验证一下同时看一下质粒上有没有引物的其他结合位点
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
7楼2010-08-13 20:10:05
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清新栀子

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你用的什么牌子的T载体啊，我用的宝生物的simpleT载，假阳性特别多，我都不敢往下面做了，崩溃。呜呜呜，有人可以推荐个好点的simple T 载体吗？
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8楼2010-08-14 16:45:14
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大白菜123789

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PMD18-T，好使
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9楼2010-08-14 22:23:09
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 清新栀子 at 2010-08-14 16:45:14:
你用的什么牌子的T载体啊，我用的宝生物的simpleT载，假阳性特别多，我都不敢往下面做了，崩溃。呜呜呜，有人可以推荐个好点的simple T 载体吗？

progma的不错，就是贵点。还有Tiangen，transgen的也不错，物美价廉
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10楼2010-08-15 08:23:59
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