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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 急急急！巢式PCR，第二轮产物跑胶点样孔有亮带，似有东西跑不出
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zhejiahuo1

铁虫 (小有名气)

[求助] 急急急！巢式PCR，第二轮产物跑胶点样孔有亮带，似有东西跑不出

大家有谁了解或是做过巢式PCR？我把第一轮的产物和第二轮的产物进行0.8%琼脂糖凝胶电泳，第二轮产物点样孔里有亮带，好像是有东西跑不出，将第二轮产物稀释10倍时亮度减弱，稀释100倍时就更弱了，但依然跑不出东西。其实之前做了好多次，相同的引物相同的模板就没有这个问题，自从新买了酶以后，就有了这个问题了。用了分装好未开封的引物，也重提了模板，还是不行，我做了酶的对比，换了别人的酶，，有时别人的酶会有这种问题有时又不会，。做的我头都大了，不知如何是好！如果说是PCR程序的问题，我之前都做的好好的，没有什么问题啊，大家有谁遇到过，快来帮我解答下或是分析分析，先谢过了！！！！！！！！！！
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1楼 2012-06-17 07:26:46
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zhejiahuo1

铁虫 (小有名气)
在线等，大家快来帮帮忙！
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2楼2012-06-17 10:33:54
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jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会是酶和DNA结合在一起跑不出去，加点SDS在样品里面再跑看看。
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3楼2012-06-17 14:14:01
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zhejiahuo1

铁虫 (小有名气)
有可能，我试试，谢谢啦
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4楼2012-06-17 15:46:52
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倾听世界0721

金虫 (小有名气)
照你说的，似乎是酶有问题。
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5楼2012-07-16 10:22:05
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进军海洋

木虫 (著名写手)

将军

【答案】应助回帖

楼主加SDS跑了吗？效果如何？
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前进，前进，再前进！
6楼2013-02-05 08:56:40
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北欧神鱼

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 进军海洋 at 2013-02-05 08:56:40
楼主加SDS跑了吗？效果如何？

我也遇到类似情况，想问问加了SDS以后效果如何？是在哪一步加多少SDS呢？
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7楼2015-03-15 20:53:07
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fiafiafiaaaa

铁虫 (初入文坛)
楼主您好，我现在也是遇到这样的问题，能不能添加您的联系方式，具体请教您。
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8楼2019-07-11 16:57:43
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