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zhejiahuo1

铁虫 (小有名气)

[求助] 急急急!巢式PCR,第二轮产物跑胶点样孔有亮带,似有东西跑不出

大家有谁了解或是做过巢式PCR?我把第一轮的产物和第二轮的产物进行0.8%琼脂糖凝胶电泳,第二轮产物点样孔里有亮带,好像是有东西跑不出,将第二轮产物稀释10倍时亮度减弱,稀释100倍时就更弱了,但依然跑不出东西。其实之前做了好多次,相同的引物相同的模板就没有这个问题,自从新买了酶以后,就有了这个问题了。用了分装好未开封的引物,也重提了模板,还是不行,我做了酶的对比,换了别人的酶,,有时别人的酶会有这种问题有时又不会,。做的我头都大了,不知如何是好!如果说是PCR程序的问题,我之前都做的好好的,没有什么问题啊,大家有谁遇到过,快来帮我解答下或是分析分析,先谢过了!!!!!!!!!!
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zhejiahuo1

铁虫 (小有名气)

在线等,大家快来帮帮忙!
2楼2012-06-17 10:33:54
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jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
会不会是酶和DNA结合在一起跑不出去,加点SDS在样品里面再跑看看。
3楼2012-06-17 14:14:01
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zhejiahuo1

铁虫 (小有名气)

有可能,我试试,谢谢啦
4楼2012-06-17 15:46:52
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倾听世界0721

金虫 (小有名气)

照你说的,似乎是酶有问题。
5楼2012-07-16 10:22:05
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进军海洋

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

楼主加SDS跑了吗?效果如何?
6楼2013-02-05 08:56:40
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北欧神鱼

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 进军海洋 at 2013-02-05 08:56:40
楼主加SDS跑了吗?效果如何?

我也遇到类似情况,想问问加了SDS以后效果如何?是在哪一步加多少SDS呢?
7楼2015-03-15 20:53:07
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fiafiafiaaaa

铁虫 (初入文坛)

楼主您好,我现在也是遇到这样的问题,能不能添加您的联系方式,具体请教您。
8楼2019-07-11 16:57:43
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