24小时热门版块排行榜    

查看: 1699  |  回复: 11

piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

[求助] 巢式PCR后不是单一带

做DGGE回收胶,回收胶后用不带夹子的引物用巢式PCR扩增,扩增片段约230bp,可扩出来的条带不单一,目的条带很亮,但上方像抹带,亮度没有目的条带亮,和目的条带相连,不知道是怎么回事?是程序设计上问题还是引物的问题呢?哎,郁闷。大家帮帮忙,我的PCR产物是要测序的,测不出来结果,我觉得是跟PCR产物的条带不单一有关。可也不知道咋办才好。求做DGGE方面的虫友QQ:303780897 http://good.gd/1394954.htm[/url]

[ Last edited by piaoyuaaa on 2011-7-13 at 15:42 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~!

那就切胶克隆测序呗。。。
2楼2011-07-14 11:55:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2011-07-14 11:55:06:
那就切胶克隆测序呗。。。

切胶克隆测序?能不能说得具体点,谢谢!
3楼2011-07-14 18:51:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~!

就是把你的目标带切胶,纯化,做克隆,再送去测序
4楼2011-07-14 19:24:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2011-07-14 19:24:07:
就是把你的目标带切胶,纯化,做克隆,再送去测序

目标带与杂带相连,不知道切胶可以不?你们用的是试剂盒纯化的吗?没做过克隆,不会哦,想直接测序,不知道可以不?
5楼2011-07-15 09:17:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~!

引用回帖:
Originally posted by piaoyuaaa at 2011-07-15 09:17:21:
目标带与杂带相连,不知道切胶可以不?你们用的是试剂盒纯化的吗?没做过克隆,不会哦,想直接测序,不知道可以不?

直接测序的话,你的条带不纯,测不出来的,即使得到峰图,也不能用,有杂峰不可信啊。。。
6楼2011-07-15 09:36:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2011-07-15 09:36:55:
直接测序的话,你的条带不纯,测不出来的,即使得到峰图,也不能用,有杂峰不可信啊。。。

那要是克隆测序呢,我是回收一次DGGE胶的,而且PCR产物又不是很纯,做克隆测序会有结果吗?
7楼2011-07-15 10:32:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~!

PCR 产物不纯才必须要做克隆,不要,测序得不到结果啊。。
8楼2011-07-15 10:44:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2011-07-15 10:44:26:
PCR 产物不纯才必须要做克隆,不要,测序得不到结果啊。。

请问Ta克隆测序的成功率有多高?会不会克隆测序也测不出来呢?
9楼2011-07-15 20:05:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~!

引用回帖:
Originally posted by piaoyuaaa at 2011-07-15 20:05:25:
请问Ta克隆测序的成功率有多高?会不会克隆测序也测不出来呢?

TA克隆,你会测验条带长度的啊,一般如果切胶纯化后DNA含量较高的话,一般成功率有90%以上吧
10楼2011-07-15 20:43:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 piaoyuaaa 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了 +11 wuchongjun 2026-08-20 15/750 2026-08-20 17:28 by wuchongjun
[基金申请] 科研孤儿太难了 +7 我4大白菜 2026-08-20 7/350 2026-08-20 17:26 by SCUwjq
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +9 zju2000 2026-08-16 10/500 2026-08-20 15:56 by Leogzhya
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] 言之凿凿,明天官网会通知放榜? +14 医学老男孩 2026-08-20 16/800 2026-08-20 15:47 by LNP@mRNA
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +16 Ldrop2023 2026-08-13 20/1000 2026-08-20 11:07 by xskun
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见