应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 巢式PCR后不是单一带
121/2返回列表12下一页
查看: 1104  |  回复: 11
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者piaoyuaaa将赠送您 2 个金币

piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

[求助] 巢式PCR后不是单一带

做DGGE回收胶，回收胶后用不带夹子的引物用巢式PCR扩增，扩增片段约230bp，可扩出来的条带不单一，目的条带很亮，但上方像抹带，亮度没有目的条带亮，和目的条带相连，不知道是怎么回事？是程序设计上问题还是引物的问题呢？哎，郁闷。大家帮帮忙，我的PCR产物是要测序的，测不出来结果，我觉得是跟PCR产物的条带不单一有关。可也不知道咋办才好。求做DGGE方面的虫友QQ:303780897 http://good.gd/1394954.htm[/url]

[ Last edited by piaoyuaaa on 2011-7-13 at 15:42 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼2011-07-13 15:35:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
那就切胶克隆测序呗。。。
赞一下 回复此楼
2楼2011-07-14 11:55:06
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyuaaa

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2011-07-14 11:55:06:
那就切胶克隆测序呗。。。

切胶克隆测序？能不能说得具体点，谢谢！
赞一下 回复此楼
3楼2011-07-14 18:51:55
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
就是把你的目标带切胶，纯化，做克隆，再送去测序
赞一下 回复此楼
4楼2011-07-14 19:24:07
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyuaaa

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2011-07-14 19:24:07:
就是把你的目标带切胶，纯化，做克隆，再送去测序

目标带与杂带相连，不知道切胶可以不？你们用的是试剂盒纯化的吗?没做过克隆，不会哦，想直接测序，不知道可以不？
赞一下 回复此楼
5楼2011-07-15 09:17:21
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
引用回帖:
Originally posted by piaoyuaaa at 2011-07-15 09:17:21:
目标带与杂带相连，不知道切胶可以不？你们用的是试剂盒纯化的吗?没做过克隆，不会哦，想直接测序，不知道可以不？

直接测序的话，你的条带不纯，测不出来的，即使得到峰图，也不能用，有杂峰不可信啊。。。
赞一下 回复此楼
6楼2011-07-15 09:36:55
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyuaaa

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2011-07-15 09:36:55:
直接测序的话，你的条带不纯，测不出来的，即使得到峰图，也不能用，有杂峰不可信啊。。。

那要是克隆测序呢，我是回收一次DGGE胶的，而且PCR产物又不是很纯，做克隆测序会有结果吗？
赞一下 回复此楼
7楼2011-07-15 10:32:05
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
PCR 产物不纯才必须要做克隆，不要，测序得不到结果啊。。
赞一下 回复此楼
8楼2011-07-15 10:44:26
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyuaaa

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xp198766 at 2011-07-15 10:44:26:
PCR 产物不纯才必须要做克隆，不要，测序得不到结果啊。。

请问Ta克隆测序的成功率有多高？会不会克隆测序也测不出来呢？
赞一下 回复此楼
9楼2011-07-15 20:05:25
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
引用回帖:
Originally posted by piaoyuaaa at 2011-07-15 20:05:25:
请问Ta克隆测序的成功率有多高？会不会克隆测序也测不出来呢？

TA克隆，你会测验条带长度的啊，一般如果切胶纯化后DNA含量较高的话，一般成功率有90%以上吧
赞一下 回复此楼
10楼2011-07-15 20:43:11
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 piaoyuaaa 的主题更新
121/2返回列表12下一页
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 演员杨幂在核心期刊发表论文，中国广播电视学期刊 +8 babu2015 2024-06-22 10/500 2024-06-23 10:22 by msjy
[考博] 关于读博感觉自己很抓马 +10 小九月 2024-06-19 14/700 2024-06-23 08:22 by yuer111111
[基金申请] b口yq上会情况 +3 XUAAAAA 2024-06-19 3/150 2024-06-23 06:49 by nic111
[基金申请] 江苏省333人才工程 出校后被刷的概率大不大？ +6 maxbirdzhang 2024-06-19 9/450 2024-06-23 00:33 by kobe0107
[硕博家园] 怎么带研究生？ +17 豆豆小小2 2024-06-20 18/900 2024-06-23 00:14 by renxiangdzkd
[公派出国] CSC博士联培对将来就业有用吗 +3 也就这样 2024-06-22 3/150 2024-06-22 22:04 by 326lhpqk
[硕博家园] 回家两天，不想呆了 +3 368ghnf 2024-06-22 3/150 2024-06-22 17:03 by 我是王小帅
[有机交流] 三颈瓶加热 5+3 wzjwx888 2024-06-20 3/150 2024-06-22 16:38 by zyp0009928
[精细化工] 切削液交流群 +7 SZ吴彦祖 2024-06-17 7/350 2024-06-22 08:54 by gemini_li
[有机交流] 锌粉还原反应 20+4 明宝栋 2024-06-17 6/300 2024-06-22 02:29 by hwalle
[有机交流] 有机反应 50+3 雨中的红玫瑰 2024-06-19 6/300 2024-06-22 00:10 by 喜欢和一氧化二�
[基金申请] 刚刚收到科研之友邮件 +25 olivermiaoer 2024-06-19 38/1900 2024-06-21 18:46 by 6543yes
[论文投稿] ACS 编辑的意见 10+3 哈哈妞1993 2024-06-20 3/150 2024-06-21 17:06 by 投个论文
[论文投稿] 审稿 +8 香瓜木香 2024-06-19 9/450 2024-06-21 15:51 by season7865
[考博] 2025年博士申请，可先做科研助理 +5 limit888 2024-06-18 8/400 2024-06-21 12:45 by 半简体
[基金申请] 有人中过人文社科类的博后特助吗？ +4 outsider1986 2024-06-16 7/350 2024-06-21 09:54 by kyukitu
[精细化工] 试剂价格 +7 旭必上岸 2024-06-17 10/500 2024-06-20 23:35 by 相与处于陆的鱼
[基金申请] 我标书代码变了 +63 学员NHuqdk 2024-06-16 86/4300 2024-06-20 22:03 by 841790061
[论文投稿] 投稿求助 +4 平凡的日子 2024-06-19 5/250 2024-06-20 16:24 by yueyueyue@
[海外博后] 墨尔本大学博后offer要不要接 +3 kyxblmm 2024-06-18 3/150 2024-06-19 22:39 by blake1111
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭