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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物跑胶时加样孔很亮
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wuwo

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物跑胶时加样孔很亮 已有21人参与

PCR产物跑胶时加样孔很亮，下面只有二聚体无目的条带，Marker正常，绝不是蛋白污染（基因组梯度稀释做过仍是，同样基因组用另一引物P的结果加样孔正常，PCR产物测DNA结果有339ng/μL，应该是P出的产物），相应条件另一酶的PCR结果正常，换了个酶后一直P出加样孔很亮，下面只有二聚体无目的带，模板梯度做了有原浓度到稀释10000倍都是，可能是哪些原因呢？


多谢各位朋友，胶浓度是1%的，Marker是5k，目的条带应该在4k
上图

[ Last edited by wuwo on 2010-7-13 at 19:23 ]
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1楼 2010-06-13 19:49:49
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wuwo

铜虫 (小有名气)
问题已解决，降低了一点退火温度，就ok了，回复里面比较有意义的我逐一赠金币，多谢大家出谋划策，谢谢！
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21楼2010-07-20 10:03:24
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Z L N

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
26楼: Originally posted by DDDAXZ at 2014-05-21 23:35:47
你好，请问你这个问题解决了吗？我最近就出现这种问题，用的也是primestar这种酶，难道是这个酶放的时间长了？

你好  我也遇到了相同的问题   急求答案  不胜感激。
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29楼2015-11-09 10:01:46
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普通回帖

zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
建议附图
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将有能量帮助他人作为自己的人生追求！
2楼2010-06-14 00:36:57
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gaozx123

金虫 (小有名气)
楼主上图啊，不知你的目的片段多大，用多大的胶浓度啊？
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3楼2010-06-14 08:57:35
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张力民1598

铜虫 (小有名气)
有图有真相
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4楼2010-06-14 11:45:42
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)
胶浓度多少？
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5楼2010-06-14 12:27:53
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wuwo

铜虫 (小有名气)
多谢各位朋友，刚刚才把图上去，多谢各位能帮出出点子。
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6楼2010-07-13 19:24:43
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zhucexiaji

金虫 (小有名气)
看这个图，如果胶浓度没问题的话，十有八九是蛋白的缘故
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7楼2010-07-13 20:41:59
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
是不是胶的问题？
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8楼2010-07-13 21:00:20
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jqq1985

银虫 (正式写手)
样品里面蛋白浓度太大
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9楼2010-07-14 09:48:21
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loboye0931

铜虫 (小有名气)
wuwo(金币+1):谢谢，一人一个！ 2010-07-20 10:06:04
我以前也碰到过，结果发现是dNTP加错了，加成dATP了。你也检查一下试剂？还有
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10楼2010-07-14 10:51:51
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