【求助/交流】PCR产物跑胶时加样孔很亮 - 分子生物 - 综合其他

11楼2010-07-14 11:18:14

wywangying169

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wuwo(金币+1):谢谢，一人一个！ 2010-07-20 10:05:33

是不是空孔在照胶的时候反射而成啊，我也碰见过这种情况，有人曾这么给我解释

好好自学，好好工作

12楼2010-07-14 15:45:28

ymzfeng

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wuwo(金币+1):谢谢，一人一个！ 2010-07-20 10:05:25

优化下反应体系
你换的酶是什么酶
电泳时胶是否有污染或缓冲液是否有污染

13楼2010-07-14 17:21:57

Aimey

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wuwo(金币+1):谢谢，一人一个！ 2010-07-20 10:05:14

主要问题是样品不纯，样品中含糖类，蛋白类物质等，都会跑不出来。而且你的有明显拖尾，说明还有些降解了。重提吧

14楼2010-07-15 08:15:49

wuwo

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Originally posted by zhucexiaji at 2010-07-13 20:41:59:
看这个图，如果胶浓度没问题的话，十有八九是蛋白的缘故

确实不是蛋白，PCR产物我测过DNA纯度，很高，没有蛋白……而且同样基因组其他酶P的效果完全正常

15楼2010-07-15 09:36:21

wuwo

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Originally posted by loboye0931 at 2010-07-14 10:51:51:
我以前也碰到过，结果发现是dNTP加错了，加成dATP了。你也检查一下试剂？还有

这个原因应该也不是，同样基因组用其他引物P过（有几对引物同时做的），也是这个酶和PCR体系，其他引物PCR结果正常，

16楼2010-07-15 09:38:26

wuwo

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Originally posted by wywangying169 at 2010-07-14 15:45:28:
是不是空孔在照胶的时候反射而成啊，我也碰见过这种情况，有人曾这么给我解释

这个我网上搜索原因时也搜到过，确实有这种情况，不过这里不是，我直接加防护板肉眼看，就是这样，不是反光，而且Marker及未加样孔均正常，还是谢谢！

17楼2010-07-15 09:42:10

wuwo

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Originally posted by ymzfeng at 2010-07-14 17:21:57:
优化下反应体系
你换的酶是什么酶
电泳时胶是否有污染或缓冲液是否有污染

谢谢！反应体系和条件我正在优化中，酶是takara的PrimerSTAR，能P长链的保真酶，这酶应该是可以，污染比较不会，这边buf等用的很快，经常换新，而且其他人前后跑的也都正常……无语了

18楼2010-07-15 09:44:47

wuwo

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Originally posted by Aimey at 2010-07-15 08:15:49:
主要问题是样品不纯，样品中含糖类，蛋白类物质等，都会跑不出来。而且你的有明显拖尾，说明还有些降解了。重提吧

糖类可能有，但从基因组提取过程看应该极少，蛋白基本排除，测过纯度很高的。拖尾确实……不过基因组为前一天新提……

19楼2010-07-15 09:46:41

holyala

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wuwo(金币+1):谢谢，一人一个！ 2010-07-20 10:04:01

那个smear不知道是什么，不过底下有很明显的引物二聚体，这说明PCR反应不完全嘛。先优化个体系再说咯？

20楼2010-07-15 18:00:10