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wuwo

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物跑胶时加样孔很亮已有21人参与

PCR产物跑胶时加样孔很亮,下面只有二聚体无目的条带,Marker正常,绝不是蛋白污染(基因组梯度稀释做过仍是,同样基因组用另一引物P的结果加样孔正常,PCR产物测DNA结果有339ng/μL,应该是P出的产物),相应条件另一酶的PCR结果正常,换了个酶后一直P出加样孔很亮,下面只有二聚体无目的带,模板梯度做了有原浓度到稀释10000倍都是,可能是哪些原因呢?


多谢各位朋友,胶浓度是1%的,Marker是5k,目的条带应该在4k
上图

[ Last edited by wuwo on 2010-7-13 at 19:23 ]
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wuwo

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by ymzfeng at 2010-07-14 17:21:57:
优化下反应体系
你换的酶是什么酶
电泳时胶是否有污染或缓冲液是否有污染

谢谢!反应体系和条件我正在优化中,酶是takara的PrimerSTAR,能P长链的保真酶,这酶应该是可以,污染比较不会,这边buf等用的很快,经常换新,而且其他人前后跑的也都正常……无语了
18楼2010-07-15 09:44:47
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gaozx123

金虫 (小有名气)

楼主上图啊,不知你的目的片段多大,用多大的胶浓度啊?
3楼2010-06-14 08:57:35
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wuwo

铜虫 (小有名气)

多谢各位朋友,刚刚才把图上去,多谢各位能帮出出点子。
6楼2010-07-13 19:24:43
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zhucexiaji

金虫 (小有名气)

看这个图,如果胶浓度没问题的话,十有八九是蛋白的缘故
7楼2010-07-13 20:41:59
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