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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR产物跑胶时加样孔很亮
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wuwo

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR产物跑胶时加样孔很亮 已有21人参与

PCR产物跑胶时加样孔很亮，下面只有二聚体无目的条带，Marker正常，绝不是蛋白污染（基因组梯度稀释做过仍是，同样基因组用另一引物P的结果加样孔正常，PCR产物测DNA结果有339ng/μL，应该是P出的产物），相应条件另一酶的PCR结果正常，换了个酶后一直P出加样孔很亮，下面只有二聚体无目的带，模板梯度做了有原浓度到稀释10000倍都是，可能是哪些原因呢？


多谢各位朋友，胶浓度是1%的，Marker是5k，目的条带应该在4k
上图

[ Last edited by wuwo on 2010-7-13 at 19:23 ]
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1楼 2010-06-13 19:49:49
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wuwo

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ymzfeng at 2010-07-14 17:21:57:
优化下反应体系
你换的酶是什么酶
电泳时胶是否有污染或缓冲液是否有污染

谢谢！反应体系和条件我正在优化中，酶是takara的PrimerSTAR，能P长链的保真酶，这酶应该是可以，污染比较不会，这边buf等用的很快，经常换新，而且其他人前后跑的也都正常……无语了
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18楼2010-07-15 09:44:47
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gaozx123

金虫 (小有名气)
楼主上图啊，不知你的目的片段多大，用多大的胶浓度啊？
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3楼2010-06-14 08:57:35
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wuwo

铜虫 (小有名气)
多谢各位朋友，刚刚才把图上去，多谢各位能帮出出点子。
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6楼2010-07-13 19:24:43
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zhucexiaji

金虫 (小有名气)
看这个图，如果胶浓度没问题的话，十有八九是蛋白的缘故
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7楼2010-07-13 20:41:59
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