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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于PCR产物与pMD 19Tsimple连接的问题
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794378428

银虫 (小有名气)

[求助] 关于PCR产物与pMD 19Tsimple连接的问题

我的PCR纯化产物为什么pMD 19Tsimple连接不上啊，求指导
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1楼2011-05-04 08:32:32
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794378428

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gppwfh at 2011-05-04 10:40:17:
你做pcr的时候用的聚合酶是？如果是高保真酶，3‘没有A，当然和simple连不上了。

是Taq酶，不需要加A吧
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6楼2011-05-04 21:05:02
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银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-05-04 08:52:31:
1：连接体系的问题，连接时间呢？
2：质粒和你的目的基因酶切是否完全?
3:感受态细胞又如何？

连接时间有影响吗，我的目的基因950多bp，那个试剂盒上说连接30min可以，我连接了3h
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7楼2011-05-04 21:06:49
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银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by aegeand at 2011-05-08 18:28:39:
顺便把我的烦恼和楼主一起分享吧。

我的目的片段在3.4 左右，LA扩增后，割胶回收目的片段，电泳检测回收结果，用最普通的taq加A尾（听说LA的加尾效率不是很高），用PCR产物纯化试剂盒纯化，在电泳检测产物，测 ...

貌似分子实验很难做啊，呵呵，不知道问题出在哪里啊，我也很苦闷，继续努力吧，多看看理论方面的书，加强实验技能方面，呵呵，我老板这么要求的
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12楼2011-05-08 21:48:05
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