应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T4连接酶连接问题
81/1返回列表
查看: 3255  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zoulong312

木虫 (小有名气)

[交流] T4连接酶连接问题 已有4人参与

TaKaRa T4 ligase 50µL连接体系过夜连接150ng外源片段和200ng载体后，加入1/10体积的3M 醋酸钠（pH5.2），混匀后，加入2.5倍体积的冷无水乙醇，-20℃静置6个小时后，12000rpm离心10后，没有看见沉淀正常吗？实验室有师兄说他的可以看见沉淀，不知道是不是我实验中出现了什么问题。请牛人指点迷津。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
Dragon
1楼 2012-04-20 20:10:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

果子么么茶

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看不见不代表没有 可以跑胶看一下啊
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-04-20 21:10:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zoulong312

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 果子么么茶 at 2012-04-20 21:10:31:
看不见不代表没有 可以跑胶看一下啊

我是要用来建库的，所以要求量比较大，做过转化可是库容量不是很高。所以担心是不是沉淀的时候损失了较多的DNA
赞一下 回复此楼
Dragon
3楼2012-04-20 21:42:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酶切专家

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+2, Good！ 2012-04-20 23:04:53
如果是建库，用来做连接的载体和外源片段都应该在ug水平，而不是才100-200ng.而且可以直接用PCR快纯试剂盒进行回收（最后用水洗脱，方便电转）
赞一下 回复此楼
4楼2012-04-20 22:42:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piggpi

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
乙醇沉淀回收和试剂盒回收都会有一定的损失的，没有说哪个一定好。另外，乙醇沉淀离心后真能看到稍透明的沉淀说明提取回收质量很好，看不到也不见得就少，至少我回收后没看到过，但加水溶解后鉴定浓度也是可以的，所以放心吧。建库的话取1.0-2.0ug足够打断建库。
赞一下 回复此楼
在很久很久以前
5楼2012-04-20 23:31:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zoulong312

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-04-20 22:42:26:
如果是建库，用来做连接的载体和外源片段都应该在ug水平，而不是才100-200ng.而且可以直接用PCR快纯试剂盒进行回收（最后用水洗脱，方便电转）

我一般同时连好几支，只是每一支的体系就是那么大，但心体系太大会出现什么问题。
赞一下 回复此楼
Dragon
6楼2012-04-21 09:23:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zoulong312

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by piggpi at 2012-04-20 23:31:21:
乙醇沉淀回收和试剂盒回收都会有一定的损失的，没有说哪个一定好。另外，乙醇沉淀离心后真能看到稍透明的沉淀说明提取回收质量很好，看不到也不见得就少，至少我回收后没看到过，但加水溶解后鉴定浓度也是可以的， ...

3Q，我下次也测一下浓度试试看。
赞一下 回复此楼
Dragon
7楼2012-04-21 09:25:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxh502976898

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你可以试一下DNAmate核酸共沉淀试剂 http://www.takara.com.cn/?action ... =164&subclass=1
赞一下 回复此楼
8楼2012-08-21 09:47:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zoulong312 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭