24小时热门版块排行榜    

查看: 3355  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zoulong312

木虫 (小有名气)

[交流] T4连接酶连接问题 已有4人参与

TaKaRa T4 ligase 50µL连接体系过夜连接150ng外源片段和200ng载体后,加入1/10体积的3M 醋酸钠(pH5.2),混匀后,加入2.5倍体积的冷无水乙醇,-20℃静置6个小时后,12000rpm离心10后,没有看见沉淀正常吗?实验室有师兄说他的可以看见沉淀,不知道是不是我实验中出现了什么问题。请牛人指点迷津。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

Dragon
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zoulong312

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 果子么么茶 at 2012-04-20 21:10:31:
看不见不代表没有 可以跑胶看一下啊

我是要用来建库的,所以要求量比较大,做过转化可是库容量不是很高。所以担心是不是沉淀的时候损失了较多的DNA
Dragon
3楼2012-04-20 21:42:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

果子么么茶

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看不见不代表没有 可以跑胶看一下啊
2楼2012-04-20 21:10:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酶切专家

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西瓜: 金币+2, Good! 2012-04-20 23:04:53
如果是建库,用来做连接的载体和外源片段都应该在ug水平,而不是才100-200ng.而且可以直接用PCR快纯试剂盒进行回收(最后用水洗脱,方便电转)
4楼2012-04-20 22:42:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piggpi

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
乙醇沉淀回收和试剂盒回收都会有一定的损失的,没有说哪个一定好。另外,乙醇沉淀离心后真能看到稍透明的沉淀说明提取回收质量很好,看不到也不见得就少,至少我回收后没看到过,但加水溶解后鉴定浓度也是可以的,所以放心吧。建库的话取1.0-2.0ug足够打断建库。
在很久很久以前
5楼2012-04-20 23:31:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +4 gdd2018 2026-08-28 9/450 2026-08-28 14:22 by jklily
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
信息提示
请填处理意见