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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 使用T4连接酶的问题
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junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生

[求助] 使用T4连接酶的问题

使用T4 DNA 连接酶连接的产物，可以直接转化吗？


25微升体系如何确定？
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寻找方向，前进
1楼 2011-11-14 17:08:03
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励积极应助！ 2011-11-14 19:33:11
可以的，25微升体系：1ul T4 ligase，2.5ul 10*buffer，其余就是载体酶切产物和基因酶切产物了，两者的体积比根据浓度来调整的。
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2楼2011-11-14 17:55:39
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zyly605

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4): 鼓励积极应助！ 2011-11-14 19:33:19
连接产物直接转化。连接在4℃或16℃过夜（具体视载体和目的基因而定）
5ul的连接体系即足够：T4 buffer 1ul，T4连接酶 1ul，片段：载体=10:1（摩尔比），水补足5ul。连接效率挺高的
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3楼2011-11-14 19:19:23
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助回帖! 2011-11-15 17:37:10
加感受态时，体积应至少为连接体系的5倍左右，25ul体系偏大些，建议10ul体系或是上面的同学提到的5ul体系即可。
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jiayoubashaonian
4楼2011-11-14 21:49:16
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芥末猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3927046楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-11-14 21:49:16
加感受态时，体积应至少为连接体系的5倍左右，25ul体系偏大些，建议10ul体系或是上面的同学提到的5ul体系即可。

你好 能问下为什么加感受态时，体积应至少为连接体系的5倍左右？？连接体系对后续实验有什么影响吗？？  谢谢
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5楼2012-07-16 17:25:13
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