| 查看: 1960 | 回复: 7 | |||
[求助]
求助连接反应中的问题，谢谢!
|
|
大家好，连接反应中遇到了问题，希望大家给予帮助，谢谢！ 最近一直在构建重组质粒载体，载体为PET28a，目的片段大约为500bp。因为我是在重复师长的实验，师长使用的连接条件是：NEB连接酶，22度，10min。因为我们没有定NEB连接酶，因此在开始时，我使用的连接条件是Takara T4连接酶，22度，10min。后来发现连不上，便将条件调节为16度，3个小时。可是转化涂板后发现依然没有单克隆生长。凝胶显示酶切也正常，回收片段的浓度也测定了，根据载体与目的片段1:10进行连接，可是，就是长不出单克隆。 另外，想请问：加连接体系时时需要是冰浴条件下吗？是否是在里阿杰反应中有一些该注意的细节没有注意呢？ 我实在是找不出自己是哪里出现问题了，希望大家给予帮助。谢谢了！ |
回复此楼» 猜你喜欢
源自蕨类植物的抗炎美白活性分子去甲氧基荚果蕨素 | Biochempartner
已经有0人回复
-
肠道里的"代谢开关"：Fexaramine用肠道限制性重新定义 FXR 激动剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有114人回复
-
DMXAA：从血管破坏剂到STING通路研究的关键工具分子 | Biochempartner
已经有0人回复
-
靶向PD-L1的人源化单克隆抗体阿特珠单抗
已经有0人回复
-
"探针之父"(+)-JQ-1如何改变表观遗传研究 | Biochempartner
已经有0人回复
-
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 【求助】请教一个关于过渡态做IRC向前向后的问题
已经有3人回复
- 【求助/交流】聚乙二醇在连接反应中的作用
已经有18人回复
- 【求助】关于Gambit中几何元素的连接问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】求经验人士解答一下连接转化目的片段加量问题，谢谢。。。
已经有3人回复
- 【求助/交流】请教3000bp的条带的连接问题
已经有15人回复
- 【求助】请教大家一个问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】请教连接转化方面的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】超大片段连接问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】连接效率问题
已经有3人回复
- 【求助/交流】连接总是连不上，如何解决
已经有10人回复
- 【求助】请教纳米连接巯基问题，非常感谢！！
已经有6人回复
- 【求助/交流】双酶切连接不上的问题！谢谢！
已经有4人回复
- 【求助】陶瓷材料连接问题
已经有8人回复
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16309.3
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3657
- 在线: 290.6小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
2楼2011-04-23 22:52:01
xiaoweiwei121
荣誉版主 (文坛精英)
这潭水蓝的深邃
- MolEPI: 5
- 应助: 18 (小学生)
- 贵宾: 39.097
- 金币: 106416
- 散金: 2773
- 红花: 197
- 沙发: 109
- 帖子: 35580
- 在线: 2157.8小时
- 虫号: 426591
- 注册: 2007-07-28
- 性别: MM
- 专业: 蛋白质组学
- 管辖: 虫友互识
【答案】应助回帖
★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-04-23 23:30:27
wzc4884(金币+3): 2011-04-24 14:35:36
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-04-23 23:30:27
wzc4884(金币+3): 2011-04-24 14:35:36
|
当没有问题的时候，怎么做都行， 一旦有问题了，就郁闷了 建议你做实验的时候，把对照做全了，然后才好分析哪一步出了问题 具体请参看，http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3105782&authorid=426591 |
3楼2011-04-23 23:18:41
sfb1020
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1271.3
- 红花: 2
- 帖子: 241
- 在线: 68小时
- 虫号: 466293
- 注册: 2007-11-23
- 性别: GG
- 专业: 保护生物学与恢复生态学
4楼2011-04-24 09:47:10
5楼2011-04-24 14:35:57
beibei9535
荣誉版主 (职业作家)
晕晕小版主~ 姑娘你好！
- MolEPI: 7
- 应助: 15 (小学生)
- 贵宾: 1.093
- 金币: 4037.5
- 散金: 5916
- 红花: 76
- 沙发: 19
- 帖子: 3211
- 在线: 1083.4小时
- 虫号: 769521
- 注册: 2009-05-13
- 专业: 微生物学
- 管辖: 海外院所点评
6楼2011-04-24 16:44:11
qiujinfeng
木虫 (知名作家)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 28623.8
- 散金: 17
- 红花: 3
- 沙发: 2
- 帖子: 5968
- 在线: 1398.6小时
- 虫号: 1240658
- 注册: 2011-03-21
- 专业: 有机合成
7楼2011-04-24 23:18:59
yuxia82012
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 4980
- 散金: 2225
- 红花: 2
- 帖子: 1340
- 在线: 426.5小时
- 虫号: 781881
- 注册: 2009-05-29
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
8楼2011-04-24 23:37:00
100