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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】双酶切连接不上的问题！谢谢！
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superyuanjia

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】双酶切连接不上的问题！谢谢！ 已有4人参与

我用Pst1和EcoR1双酶切pCAM1391连接一个启动子序列构建GUS载体，结果总是连接转化筛不出2000多的启动子序列，一筛GUS就都有，感觉像载体自连了！但双酶切不应该啊。后来换用原来已经构建好的1391载体切下原来连进去的启动子片段，酶切跑电泳，片段和载体都是两条带，能明显分开，回收连接转化后仍然筛不出来启动子序列！崩溃！请教一下大家！谢谢！
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1楼 2010-06-21 15:26:25
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ymzfeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先确定下你回收小片段是否成功
其次考虑下你的连接效率和双酶切效率了
仅供参考
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2楼2010-06-21 15:45:22
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superyuanjia

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by ymzfeng at 2010-06-21 15:45:22:
首先确定下你回收小片段是否成功
其次考虑下你的连接效率和双酶切效率了
仅供参考

回收后也也都跑电泳了，挺亮的！
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3楼2010-06-21 16:43:11
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琴瑟不鸣

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你是连不上去片段，还是连上去东西，但是筛不出目的序列啊？
赞一下(1人) 回复此楼
老虎
4楼2010-06-22 16:19:26
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1、酶切不完全
2、胶回收不好
3、连接体系
赞一下(1人) 回复此楼
梦在路就在！
5楼2010-06-22 16:59:55
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