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咨询个基因重组实验中问题
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各位高手们， 咨询大家个问题，基因重组实验中有一步是给切好的质粒载体用碱性磷酸酶去磷酸化，之后再用连接酶连接目的基因片段和质粒载体。请问，这步中如果把去磷酸化的质粒载体再用连接酶连接，是否可以在连接上？如果不可以，那为什么能把质粒载体和目的基因片段连接上？ [ Last edited by yuliansheng on 2011-4-27 at 12:46 ] |
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xuguanghai
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【答案】应助回帖
★ ★ ★
yuliansheng(金币+1): 说的太好、太详细了，谢谢，真的很感谢！ 2011-04-27 20:48:46
西瓜(金币+3): Good!可惜不是原创，离EPI差一点。 2011-04-27 21:35:45
yuliansheng(金币+1): 说的太好、太详细了，谢谢，真的很感谢！ 2011-04-27 20:48:46
西瓜(金币+3): Good!可惜不是原创，离EPI差一点。 2011-04-27 21:35:45
| 常常使用碱性磷酸酶去除5’磷酸基团以抑制载体DNA的自身环化。利用T4 DNA连接酶进行目的DNA片段和载体的体外连接反应，也就是在双链DNA 5’磷酸和相邻的3’羟基之间形成新的共价键。如载体的两条链都带有5’磷酸（未脱磷），可形成4个新的磷酸二酯键；如载体DNA已脱磷，则只能形成2个新的磷酸二酯键，此时产生的重组DNA带有两个单链缺口，在导入感受态细胞后可被修复。 |
2楼2011-04-27 13:51:25
3楼2011-04-27 20:50:54
4楼2011-05-19 09:15:09
eileen8519
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