| 查看: 1344 | 回复: 4 | ||
[求助]
咨询个基因重组实验中问题
|
|
各位高手们， 咨询大家个问题，基因重组实验中有一步是给切好的质粒载体用碱性磷酸酶去磷酸化，之后再用连接酶连接目的基因片段和质粒载体。请问，这步中如果把去磷酸化的质粒载体再用连接酶连接，是否可以在连接上？如果不可以，那为什么能把质粒载体和目的基因片段连接上？ [ Last edited by yuliansheng on 2011-4-27 at 12:46 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有171人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 做过用同源重组进行基因敲出的朋友请进，PCR做不出来！！
已经有16人回复
- 大肠杆菌基因重组时PKD46高温怎么都消除不了
已经有25人回复
- 一个关于水稻基因图位克隆的问题诚挚恳求大牛解答
已经有35人回复
- 目的基因导入到受体细胞会发生基因重组吗？说说原因！
已经有6人回复
- 在基因重组过程中，怎样鉴别质粒载体是否被限制性内切酶切好？
已经有10人回复
- 【求助/交流】基因重组中的连接问题
已经有6人回复
- 【分享】DNA重组实验中的部分技术
已经有159人回复
xuguanghai
木虫 (职业作家)
- MolEPI: 1
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 2841.2
- 散金: 2764
- 红花: 16
- 沙发: 42
- 帖子: 3072
- 在线: 296.7小时
- 虫号: 449061
- 注册: 2007-11-02
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
【答案】应助回帖
★ ★ ★
yuliansheng(金币+1): 说的太好、太详细了，谢谢，真的很感谢！ 2011-04-27 20:48:46
西瓜(金币+3): Good!可惜不是原创，离EPI差一点。 2011-04-27 21:35:45
yuliansheng(金币+1): 说的太好、太详细了，谢谢，真的很感谢！ 2011-04-27 20:48:46
西瓜(金币+3): Good!可惜不是原创，离EPI差一点。 2011-04-27 21:35:45
| 常常使用碱性磷酸酶去除5’磷酸基团以抑制载体DNA的自身环化。利用T4 DNA连接酶进行目的DNA片段和载体的体外连接反应，也就是在双链DNA 5’磷酸和相邻的3’羟基之间形成新的共价键。如载体的两条链都带有5’磷酸（未脱磷），可形成4个新的磷酸二酯键；如载体DNA已脱磷，则只能形成2个新的磷酸二酯键，此时产生的重组DNA带有两个单链缺口，在导入感受态细胞后可被修复。 |
2楼2011-04-27 13:51:25
3楼2011-04-27 20:50:54
4楼2011-05-19 09:15:09
eileen8519
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1420.4
- 散金: 18
- 红花: 1
- 帖子: 243
- 在线: 75.6小时
- 虫号: 802150
- 注册: 2009-07-02
- 性别: MM
- 专业: 免疫生物学
5楼2011-10-13 12:02:49
