应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T4连接酶连接问题
81/1返回列表
查看: 3351  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zoulong312

木虫 (小有名气)

[交流] T4连接酶连接问题 已有4人参与

TaKaRa T4 ligase 50µL连接体系过夜连接150ng外源片段和200ng载体后，加入1/10体积的3M 醋酸钠（pH5.2），混匀后，加入2.5倍体积的冷无水乙醇，-20℃静置6个小时后，12000rpm离心10后，没有看见沉淀正常吗？实验室有师兄说他的可以看见沉淀，不知道是不是我实验中出现了什么问题。请牛人指点迷津。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
Dragon
1楼 2012-04-20 20:10:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

果子么么茶

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看不见不代表没有 可以跑胶看一下啊
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-04-20 21:10:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zoulong312

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 果子么么茶 at 2012-04-20 21:10:31:
看不见不代表没有 可以跑胶看一下啊

我是要用来建库的，所以要求量比较大，做过转化可是库容量不是很高。所以担心是不是沉淀的时候损失了较多的DNA
赞一下 回复此楼
Dragon
3楼2012-04-20 21:42:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酶切专家

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+2, Good！ 2012-04-20 23:04:53
如果是建库，用来做连接的载体和外源片段都应该在ug水平，而不是才100-200ng.而且可以直接用PCR快纯试剂盒进行回收（最后用水洗脱，方便电转）
赞一下 回复此楼
4楼2012-04-20 22:42:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piggpi

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
乙醇沉淀回收和试剂盒回收都会有一定的损失的，没有说哪个一定好。另外，乙醇沉淀离心后真能看到稍透明的沉淀说明提取回收质量很好，看不到也不见得就少，至少我回收后没看到过，但加水溶解后鉴定浓度也是可以的，所以放心吧。建库的话取1.0-2.0ug足够打断建库。
赞一下 回复此楼
在很久很久以前
5楼2012-04-20 23:31:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zoulong312

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-04-20 22:42:26:
如果是建库，用来做连接的载体和外源片段都应该在ug水平，而不是才100-200ng.而且可以直接用PCR快纯试剂盒进行回收（最后用水洗脱，方便电转）

我一般同时连好几支，只是每一支的体系就是那么大，但心体系太大会出现什么问题。
赞一下 回复此楼
Dragon
6楼2012-04-21 09:23:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zoulong312

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by piggpi at 2012-04-20 23:31:21:
乙醇沉淀回收和试剂盒回收都会有一定的损失的，没有说哪个一定好。另外，乙醇沉淀离心后真能看到稍透明的沉淀说明提取回收质量很好，看不到也不见得就少，至少我回收后没看到过，但加水溶解后鉴定浓度也是可以的， ...

3Q，我下次也测一下浓度试试看。
赞一下 回复此楼
Dragon
7楼2012-04-21 09:25:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxh502976898

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你可以试一下DNAmate核酸共沉淀试剂 http://www.takara.com.cn/?action ... =164&subclass=1
赞一下 回复此楼
8楼2012-08-21 09:47:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zoulong312 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 05:45 by gy1nBQXYQJqL
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-29 05:13 by gy1nBQXYQJqL
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-29 00:28 by winsaint
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +4 gdd2018 2026-08-28 9/450 2026-08-28 14:22 by jklily
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +3 bud_bud 2026-08-27 6/300 2026-08-28 11:53 by bud_bud
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭