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794378428

银虫 (小有名气)

[求助] 关于PCR产物与pMD 19Tsimple连接的问题

我的PCR纯化产物为什么pMD 19Tsimple连接不上啊,求指导
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 一条一金币,呵呵 2011-05-04 11:05:32
794378428(金币+1): 2011-05-04 21:03:10
794378428(金币+1): 2011-05-04 21:03:33
1:连接体系的问题,连接时间呢?
2:质粒和你的目的基因酶切是否完全?
3:感受态细胞又如何?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-05-04 08:52:31
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zlu520

至尊木虫 (职业作家)

限制人

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 有道理 2011-05-04 11:05:48
酶如果正确的话,条件一定要合适啊,时间等。。
无完人!
3楼2011-05-04 10:20:07
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liulinlin123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 对啊 2011-05-04 11:05:57
可以考虑一下 链接时增加热击  65度5min
4楼2011-05-04 10:30:56
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gppwfh

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 经验? 2011-05-04 11:06:09
你做pcr的时候用的聚合酶是?如果是高保真酶,3‘没有A,当然和simple连不上了。
5楼2011-05-04 10:40:17
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794378428

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by gppwfh at 2011-05-04 10:40:17:
你做pcr的时候用的聚合酶是?如果是高保真酶,3‘没有A,当然和simple连不上了。

是Taq酶,不需要加A吧
6楼2011-05-04 21:05:02
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794378428

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-05-04 08:52:31:
1:连接体系的问题,连接时间呢?
2:质粒和你的目的基因酶切是否完全?
3:感受态细胞又如何?

连接时间有影响吗,我的目的基因950多bp,那个试剂盒上说连接30min可以,我连接了3h
7楼2011-05-04 21:06:49
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

引用回帖:
Originally posted by 794378428 at 2011-05-04 21:06:49:
连接时间有影响吗,我的目的基因950多bp,那个试剂盒上说连接30min可以,我连接了3h

你是用连接试剂盒连的?
一般手连就可以了,我们一般16度过夜连接。。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
8楼2011-05-05 09:34:48
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励啊 2011-05-05 16:49:45
能够影响的因素太多了
你的PCR产物是用什么酶扩出来的?如果没有A尾巴那肯定连不上的
其他因素:感受态不行,抗生素用错,等等
9楼2011-05-05 15:40:02
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aegeand

铜虫 (小有名气)

同情,我也连不上,一起求答案吧
10楼2011-05-08 18:27:16
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