| 查看: 2352 | 回复: 13 | |||
[交流]
关于切胶回收后有质粒污染和拼接PCR涂抹装条带的问题，有点长，呵呵
|
|||
|
是这样的， 我要克隆一个3k的基因，此基因前段高GC（局部84%），我分成了两段来克隆，并且这两段都是经过亚克隆并且测序成功的。前段我称为K前（1647bp），后段K后（1456bp）。 K前连接酶克隆在表达载体上，K后平端拓扑克隆在T载体上。 用同样体积的质粒做模版PCR，K前有杂带，切胶回收后无杂带；K后也有杂带，切胶回收后有大于目的条带的两条杂带。 已经经过无数次的拼接，始终都得到涂抹带，程序是成熟的，以前都没有问题，不过以前我是用的突变平拼接得到的K后（因为要突变掉K后尾端的一个酶切位点），拼接没问题；现在亚克隆到T载体上，经过测序也是正确的，以之为模版PCR、切胶回收后就出现污染条带，与K前拼接全是涂抹带。 目前，包括酶、引物、水甚至是PCR管和枪头都更换了一遍全新的，仍然是涂抹带。 恳请各路英雄不吝赐教、指点迷津，在下谢过了。 |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
西瓜» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有276人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 分子生物学PCR
已经有81人回复
- 双酶切
已经有4人回复
- PCR退火温度态度会导致扩增不出目的条带么？
已经有4人回复
- pcr 带好宽啊!苦恼，求助ing!
已经有21人回复
- 质粒构建
已经有13人回复
- 求助：约6kb质粒做模板的pcr程序怎么设定啊
已经有12人回复
- 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】质粒PCR产物的回收（质粒构建）
已经有11人回复
- 【问题反馈】一对引物扩出来的产物测序后竟然是很多质粒的PCR产物，再怎么区分呢？
已经有10人回复
- 【求助/交流】PCR产物切胶回收后可不可以加A尾,做TA克隆，急！希望高手们能帮帮忙！
已经有9人回复
- 【求助/交流】DGGE 胶回收后做PCR没有条带是怎么回事？？急！！！
已经有36人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
告别流水线爽文！108万字完结仙侠《女娲石之灵石奇缘（仙界篇）》值得细品
+1/5021
-
2026年工程管理与智慧城市国际会议 (EMSC 2026)
+1/584
-
小木虫认识的老公在一起11年，去世快100天了。
+2/350
-
真诚征友
+1/173
-
基金祈福
+1/153
-
散金币
+1/120
-
[IEEE出版|EI检索|推荐至SCI专刊]第22届国际电子商务工程会议征稿3天倒计时!
+1/95
-
华中科技大学罗志强教授课题组招收2027年秋季入学博士研究生
+2/52
-
武汉，诚征男友，不异地，年龄大了
+1/35
-
论文祈福
+1/22
-
祈福基金得中，科研生涯顺利圆满
+1/14
-
中山大学具身智能方向招2027届考核制博士生
+1/7
-
【即将截止】东北大学理学院 力学 李健组2027级保研
+1/7
-
中山大学智能传感仪器方向招2027届考核制博士生
+1/6
-
中山大学可穿戴电路系统方向招2027届考核制博士生
+1/5
-
中科院大连化学物理研究所 招聘 催化剂研发方向 科研助理 2名
+1/4
-
南京大学 智能驱动与感知材料实验室 诚招申请考核博士生/科研助理/博士后
+1/4
-
祈祷老公中国基
+1/3
-
新审查指南施行半年，AI方向的专利申请是不是更看"技术味"了？
+1/2
-
2027年博士申请
+1/1
8楼2011-06-25 22:21:49
10楼2011-06-27 14:05:25
11楼2011-06-27 17:10:10
12楼2011-06-27 18:19:43
13楼2011-06-27 19:08:52
简单回复
2011-06-25 21:14
回复
yabxxh(金币+1):谢谢参与
媛媛12233楼
2011-06-25 21:29
回复
yabxxh(金币+1):谢谢参与
祝福
2011-06-25 21:35
回复
yabxxh(金币+1):谢谢参与
祝福
2011-06-25 21:45
回复
2011-06-25 21:53
回复
yabxxh(金币+1):谢谢参与
祝福
zxzqcwk7楼
2011-06-25 22:00
回复
yabxxh(金币+1):谢谢参与
pindiyou9楼
2011-06-25 22:39
回复
yabxxh(金币+1):谢谢参与
骚人追月14楼
2011-06-27 21:10
回复
yabxxh(金币+1):谢谢参与
祝福
