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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DGGE 胶回收后做PCR没有条带是怎么回事？？急！！！
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evebobo

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DGGE 胶回收后做PCR没有条带是怎么回事？？急！！！已有17人参与

我的DGGE胶回收后没有条带 能问下有什么问题吗？
胶回收用了两种方法都不行  不知道为什么  大家遇到过这种情况吗？
以前条带没分开的时候回收做PCR有条带 现在分开了却没了   期间换酶了
能是酶的问题吗？ 是新的阿  我很疑惑 很郁闷  
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1楼2010-06-27 23:09:00
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ctt1984

木虫 (正式写手)

初学者
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+5, EPI+1): 一并奖励哦 2011-05-30 12:48:49
引用回帖:
Originally posted by 良缘百合 at 2011-05-27 23:30:18:
好的，太感谢了！
现在有个现象，不太明白：我昨天切胶后，用枪头捣碎，加入无菌水至没过胶，放4℃过夜。今天发现胶没溶，是放置时间不够长吗？还是要水浴下促进胶溶呢？你处理样品时有这种现象么？

胶在4度不可能溶解，但是DNA会释放出来。
所以，吸取液体就够用了，不要管胶
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好好做事，踏实做人！
33楼2011-05-28 15:34:02
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普通回帖

evebobo

铜虫 (小有名气)
还是没有回复  是不是又发错地方了？ 还是没人知道？？？？？？
郁闷
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2楼2010-06-28 15:41:20
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evebobo

铜虫 (小有名气)
★
amisking(金币+1):淡定！ 2010-07-04 12:56:52
谁能告诉我为什么啊 ?!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-06-28 15:46:49
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zqp9110

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议加个阳性对照看看。
赞一下(1人) 回复此楼
BEYOND
4楼2010-06-28 17:10:54
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sunny_tc

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):good！ 2010-07-04 12:57:00
楼主可否先说一下是如何回收胶的呢？加水量，放置时间？另外PCR时模板的用量？同意楼上意见，如果怀疑是酶，请增加阳性对照！
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5楼2010-06-28 17:27:22
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hulqi

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用MIX吧，这才是王道
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6楼2010-06-28 19:44:14
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evebobo

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zqp9110 at 2010-06-28 17:10:54:
建议加个阳性对照看看。

谢谢你  我已经定了新的酶 做10个能出一个带  我很郁闷
胶回收用了两种方法  一是切胶后放入离心管中加入12ul双蒸水后碾碎 3000转离心30s 后50度水浴30min 然后12000转离心1min 取上清  用这个做模板PCR

二是直接将切下的胶做为模板
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7楼2010-07-01 21:21:44
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evebobo

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sunny_tc at 2010-06-28 17:27:22:
楼主可否先说一下是如何回收胶的呢？加水量，放置时间？另外PCR时模板的用量？同意楼上意见，如果怀疑是酶，请增加阳性对照！

能说的详细些吗  我也是菜鸟一只  不好意思
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8楼2010-07-01 21:22:38
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evebobo

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hulqi at 2010-06-28 19:44:14:
用MIX吧，这才是王道

MIX是什么？ 不好意思  我懂的太少了 见笑了  你具体讲讲吗？
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9楼2010-07-01 21:33:46
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evebobo

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sunny_tc at 2010-06-28 17:27:22:
楼主可否先说一下是如何回收胶的呢？加水量，放置时间？另外PCR时模板的用量？同意楼上意见，如果怀疑是酶，请增加阳性对照！

回复到6楼了  回复错了  谢谢你！
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10楼2010-07-01 21:35:10
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