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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助高手分析DGGE图谱，附PCR图和DGGE图谱
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STEF1010

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助高手分析DGGE图谱，附PCR图和DGGE图谱

第一次做的DGGE图谱，是细菌V3区的图。
DGGE条件是：60度，200V，4h。40%-60%梯度
用sybr green 染色30min
有以下问题向高手请教：
1、条带比较弥散，是不是电泳的电压和时间不对啊，该怎么改进。
2、当时跑电泳的时候人离开了，回来的时候发现胶上蓝色的那根条带已经跑出胶了，但是染色的时候却能得到结果，所以想问问蓝色的那根条带跑出胶外是否有影响？或者它到达胶的哪个位置比较合适？
请高手帮帮忙啊，实验室没人做这个，只能自己摸索，苦啊~~~
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1楼 2011-08-05 19:30:32
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天鸟

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-07 15:32:09
看你的DNA有1000BP的了
我的都是500多的就是
我跑120V,跑了9个小时的，溴酚蓝两条条带都跑出了几个小时的哦
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快乐生活，我快乐
2楼2011-08-05 21:37:06
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STEF1010

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 天鸟 at 2011-08-05 21:37:06:
看你的DNA有1000BP的了
我的都是500多的就是
我跑120V,跑了9个小时的，溴酚蓝两条条带都跑出了几个小时的哦

哪有1000bp。。只有250bp左右啊，我的是加了GC夹的V3扩增产物

marker跑到前面的条带分子量越小啊。。

哦，这样啊，意思就是说那两条带跑出去了不要紧的呀。

不要留最后那条来指示一下吗。
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3楼2011-08-06 16:28:51
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天鸟

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 欢迎多来交流哦 2011-08-07 15:32:44
你的片段看错了，你的图是反的，嘿嘿
我的500多dp，是那样的，一定要等上面那条溴酚蓝跑出去几个小时，条带才分得开。我在论坛上也有看到电压和时间的积为1000的说法，如果按照我的实验的话，也差不多是那样的。我觉得时间的确定，你可以摸索下条件的。跑两次就知道要跑多久了。祝好
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快乐生活，我快乐
4楼2011-08-07 09:01:27
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STEF1010

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 天鸟 at 2011-08-07 09:01:27:
你的片段看错了，你的图是反的，嘿嘿
我的500多dp，是那样的，一定要等上面那条溴酚蓝跑出去几个小时，条带才分得开。我在论坛上也有看到电压和时间的积为1000的说法，如果按照我的实验的话，也差不多是那样的。 ...

呵呵，谢谢呢，我今天准备先用120V跑6h看看效果。
如果效果不好的话下次就用小电压长时间乘积为1000的方法试一下。
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5楼2011-08-07 09:37:39
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doubleping

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

蓝色那条是buffer，跑出胶没有关系，我做的是V3区的，一般是9小时100伏
我实验室也没人做，导师也不做，自己摸索，很辛苦啊
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6楼2013-04-28 10:02:30
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匿名

用户注销 (初入文坛)
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7楼2013-05-28 17:32:17
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