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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 降落PCR一直 跑不出来（用于DGGE）
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popfirst

禁虫 (初入文坛)
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【分子生物】EPI帖

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1楼 2011-11-28 00:04:24
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回帖置顶 ( 共有1个 )

在雨中

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-11-28 17:57:13
popfirst(金币+5): 好吧，andy，我试试 2011-11-29 00:41:27
wanhscn(金币+2, MolEPI+1): 破格授予专家指数一枚！ 2011-12-20 15:00:01
我觉得直接用Mix不好么？很多公司的mix直接用，做DGGE效果很好啊。我做了很多次DGGE了，都没有什么问题。
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3楼2011-11-28 14:36:32
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普通回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

换个公司的酶吧，找那种适合复杂模板的酶。
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2楼2011-11-28 13:42:37
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在雨中

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流经验哦 2011-11-28 17:57:23
popfirst(金币+5): 2011-12-17 00:45:06
而且，降落时PCR跟普通PCR跑出来的产物做DGGE，图谱没有差异，我比较过。
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4楼2011-11-28 14:37:02
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thestormcong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-11-28 22:50:41
popfirst(金币+3): 试一下 2011-11-29 00:42:07
我做的也是16sv3区的扩增，后来查看了一篇外文文献，参考了上面的方法，结果跑出来条带很单一，大小也一致。程序如下：95℃ 5min
    94℃ 30s     58℃ -53℃ 30s  72℃ 30s    10个循环
    94℃ 30s     53℃ 30s           72℃ 30s    25个循环
     72℃ 10min               这个程序没有问题。
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5楼2011-11-28 19:16:15
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xudabin98

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

前面那个循环改成15，后面那个用20，酶用rTaq。
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6楼2011-11-29 08:01:33
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ironicsjq

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

popfirst(金币+2): 2011-12-03 20:55:30
不用跑降落PCR，没区别。另外，我跑降落PCR是65-55度，2个循环降1度，20个循环，55度再20个循环。
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7楼2011-12-02 11:25:01
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elbo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

popfirst(金币+5): 2011-12-03 20:55:15
虽然有许多人说普通PCR和降落PCR没有什么区别，不过据研究，如果扩增V6-V8区域的还是用普通PCR较好，不要用降落PCR，对于V3区域没有什么影响。
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8楼2011-12-03 19:33:01
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分子实验哥

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币-10): 坚决打击广告 2011-12-14 16:24:34
西瓜:编辑内容 2011-12-14 16:24
--广告内容已删除--

[ Last edited by 西瓜 on 2011-12-14 at 16:24 ]
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9楼2011-12-14 09:42:01
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love~bao

新虫 (初入文坛)
你是不是酶的量用多了呀，或者是引物量呢 我用的25uL体系，dNTP2ul； taq酶：0.2ul； 10×buffer：2.5ul；
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popfirst
10楼2011-12-19 17:51:06
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