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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 降落PCR一直 跑不出来（用于DGGE）
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popfirst

禁虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
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11楼2011-12-20 01:09:04
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zhang226296

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by thestormcong at 2011-11-28 19:16:15
我做的也是16sv3区的扩增，后来查看了一篇外文文献，参考了上面的方法，结果跑出来条带很单一，大小也一致。程序如下：95℃ 5min
    94℃ 30s     58℃ -53℃ 30s  72℃ 30s    10个循环
    94℃ 30s     53℃  ...

请问你做的降落PCR，DGGE效果怎么样啊，我怎么做不出来啊，求赐教啊
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12楼2014-03-13 13:58:24
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zhang226296

新虫 (小有名气)
请问你后面是怎么做出来的啊，求赐教，我一直做不出来啊
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13楼2014-03-18 13:44:09
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zhang226296

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 在雨中 at 2011-11-28 14:36:32
我觉得直接用Mix不好么？很多公司的mix直接用，做DGGE效果很好啊。我做了很多次DGGE了，都没有什么问题。

0请问做DGGE必须是新鲜的样吗，-20储存了几天会有影响吗
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14楼2014-03-18 13:45:25
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zhang226296

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 在雨中 at 2011-11-28 14:37:02
而且，降落时PCR跟普通PCR跑出来的产物做DGGE，图谱没有差异，我比较过。

求指点啊，我为什么一直做不出来啊，拜托，求赐教啊，感激不尽
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15楼2014-03-18 13:47:01
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在雨中

金虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by zhang226296 at 2014-03-18 13:45:25
0请问做DGGE必须是新鲜的样吗，-20储存了几天会有影响吗...

走DGGE的PCR样品最好是最近几个小时内的，但是DNA模板可以放-20摄氏度放大半年没事，不过我们是过了3个月废掉，重新提DNA。
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16楼2014-03-19 08:34:38
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jokerliu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by thestormcong at 2011-11-28 19:16:15
我做的也是16sv3区的扩增，后来查看了一篇外文文献，参考了上面的方法，结果跑出来条带很单一，大小也一致。程序如下：95℃ 5min
    94℃ 30s     58℃ -53℃ 30s  72℃ 30s    10个循环
    94℃ 30s     53℃  ...

可不可以把那篇文献名字告诉一下呢？谢谢啦
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17楼2015-03-10 08:42:14
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